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低浓度血清法培养纯化新生大鼠雪旺细胞的开题报告

一、研究背景和意义

雪旺氏细胞是一种由F.Snell等人于1953年首次鉴定的细胞，被广泛应用于研究干细胞、细胞周期、细胞分化和细胞基因组的表达等方面。然而，由于雪旺氏细胞的稳定性较差，其培养需要一定的专业技术和经验。因此，本研究旨在探索一种简单易行的低浓度血清法培养纯化新生大鼠雪旺细胞的方法，为雪旺氏细胞的研究提供一定的实验基础和技术支持。

二、研究内容和方法

本实验将采用低浓度血清法培养纯化新生大鼠雪旺细胞。具体步骤如下：

（1）选择新生大鼠脑组织，并将其置于含有0.1%胰蛋白酶、0.01%DNA酶和0.05%卵黄卵磷脂的PBS缓冲液中消化。消化时间根据脑组织的大小和年龄适当延长或缩短。

（2）过筛分离细胞，并离心沉淀。离心后加入培养基，培养基包括DMEM/F12、20%胎牛血清(FBS)、1%L-谷氨酸和1%抗生素/抗菌剂。培养基浓度可根据实验需要调节。

（3）在前期培养的3-4天后，将浓度调整至2%FBS+1%L-谷氨酸+1%抗生素/抗菌剂。天天换液。

（4）当细胞密度达到80%左右，分离并重新培养。

（5）将分离的细胞加入60次折光的纯化前细胞的菌落数4个/3ml的DMEM/F12培养基+1%N2补充剂+1%L-谷氨酸+20ng/mLEGF+20ng/mLFGF。

（6）每天换液一次。在培养第三天观察时，若细胞已分化，则将分离出的端粒酶还原细胞加入。

（7）在培养第五天观察时，可得到纯化的雪旺氏祖细胞。此时，去除不附着细胞和基质贴壁的细胞。

三、预期结果

我们预计，通过采用本研究所提出的低浓度血清法培养纯化新生大鼠雪旺细胞的方法，可以提高细胞的稳定性和生长速度，有效提高雪旺氏细胞在研究中的应用价值。同时，该方法具有操作简单、成本低廉等优点，有望在相关研究领域得到广泛应用。

四、结论和展望

本研究将通过低浓度血清法培养纯化新生大鼠雪旺细胞的方法，提高其稳定性和生长速度，为雪旺氏细胞在相关领域的应用提供了一定的实验基础和技术支持。未来，我们将进一步探索新的培养方式，并进一步深入探究雪旺氏细胞的基本特性和生物学意义。