PPARγ与GST的融合表达及在微纳米磁珠表面固定化的开题报告.docxVIP

PPARγ与GST的融合表达及在微纳米磁珠表面固定化的开题报告

一、研究背景

PPARγ（PeroxisomeProliferator-ActivatedReceptorGamma）是一种核受体，在脂质代谢、糖尿病、肥胖症等疾病的机制中发挥着重要作用。而GST（Glutathione-S-Transferase）是一种常见的降解外源和内源化合物的酶。因此，将PPARγ和GST融合表达可以实现对脂质及其代谢产物的高效挑选，从而对其功能进行深入研究。

同时，微纳米磁珠因为其具有的高比表面积、低毒性、生物相容性等优点，成为了目前生物学和医学研究领域中的热门研究方向。将PPARγ/GST固定在微纳米磁珠表面，可以实现对特定脂质及其代谢产物的高效捕获和分离，从而有利于对其进行深入的研究。

二、研究目的

本研究旨在构建PPARγ/GST融合表达载体，并将其表达于大肠杆菌中，通过亲和层析技术将目标蛋白纯化，同时在微纳米磁珠表面实现对目标蛋白的固定化，为进一步的脂质研究提供基础。

三、研究方法

1.构建PPARγ/GST融合表达载体。

将PPARγ和GST基因的编码序列通过PCR扩增，并通过SOE-PCR技术融合为PPARγ/GST融合基因。将目标基因克隆至载体中，构建PPARγ/GST融合表达载体。

2.大肠杆菌的转化和蛋白表达。

将构建好的PPARγ/GST融合表达载体转化至大肠杆菌中，并在含有适宜抗生素的LB培养基中培养过夜。收集到培养物后，通过离心将细菌沉淀，获得菌液中的目标蛋白。

3.亲和层析技术纯化蛋白。

通过亲和层析技术，利用GST标签对融合蛋白进行纯化和分离，获得纯化的PPARγ/GST融合蛋白。

4.微纳米磁珠的制备和PPARγ/GST的固定化。

制备具有羧基的微纳米磁珠，利用活化的微纳米磁珠，将纯化的PPARγ/GST融合蛋白在其表面上进行固定化。

四、预期结果

通过本研究，可以构建PPARγ/GST融合表达载体，并实现在大肠杆菌中高效表达目标蛋白，进而通过亲和层析技术将其纯化。同时，将PPARγ/GST固定在微纳米磁珠表面，实现对目标蛋白的高效捕获和分离。这一研究将为PPARγ/GST蛋白的研究提供基础，为脂质代谢机制的探究提供新的思路和方法。