液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯实验报告(华南师范大学).docx

实验报告

学生姓名 学号

专业化学（师范） 年级班级

课程名称仪器分析实验 实验项目液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯

实验类型￡验证￡设计￡综合 实验时间2020年10月7日

指导老师梁勇 实验评分

一、实验目的

1.掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法

2.了解高效液相色谱的构造、原理及操作技术

二、实验原理

1.液相色谱分离原理

储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内进行分离，最终被检测器检测。色谱柱利用欲分离的诸组分在固定相和流动相间的分配有差异（即有不同的分配系数），当两相作相对运动，这些组分在此两相中的分配反复进行，从几千次到百万次，即使组分的分配系数只有微小差异，随着液体流动相移动却可以有明显的差距，从而使这些组分都得到分离。

2.高效液相色谱分类

按分离原理可分为分配色谱、离子交换色谱、离子色谱、尺寸排阻色谱和亲和色谱等。

3.仪器组成与结构

高效液相色谱仪一般可分为高压输液系统、进样系统、分离系统和检测系统。此外还有辅助装置：如梯度淋洗、自动进样及数据处理等。

三、仪器与试剂

1.仪器

高效液相色谱仪，微量注射器10μL、100μL，1.0mL样品管

2.试剂

A苯、甲苯标液（甲醇）10.0μL/mL

B苯标液（甲醇）2.0μL/mL

C甲苯标液（甲醇）2.0μL/mL

D苯、甲苯（甲醇）未知液

四、实验内容与步骤

1.标准溶液的配制

分别移取0μL、25μL、50μL、75μL甲醇于4个1.0mL样品管中，再分别加入100μL、75μL、50μL、25μLA液，依次标记为A1、A2、A3、A4，对应浓度分别为10.0μL/mL、7.5μL/mL、5.0μL/mL、2.5μL/mL

2.苯、甲苯定性分析

在最佳的测定条件下，用10μL微量注射器，分别注射4μLB液和C液。观察记录保留时间，确定苯和甲苯的峰

3.苯、甲苯定量分析

在最佳的测定条件下，用10μL微量注射器，分别注射4μLA1液、A2液、A3液、A4液，再分别测定苯和甲苯的峰面积，以峰面积对浓度作图，做出工作曲线

在最佳的测定条件下，用10μL微量注射器，注射4μL的D液，观察记录保留时间和峰面积根据峰面积在工作曲线上查处苯和甲苯待侧溶液的浓度，并计算未知液中苯和甲苯的含量

五、数据处理与分析

1.优化色谱条件

由于甲苯为苯的同系物，两者性质比较相近，且苯与甲苯皆为极性较弱的物质。因此，在流动相中，若甲醇配比过低，分离程度较好但出峰时间长；若甲醇配比过高，则出峰时间短但分离程度不佳。当甲醇占80％，分离程度好、出峰时间合适，因此确定最佳的流动相配比，即甲醇：水=0.8：0.2。

2.定性分析

数据1为苯与甲苯混合未知液，数据2为苯标准溶液，数据3为甲苯标准溶液

样品

苯标准溶液

甲苯标准溶液

保留时间/min

3.513

4.511

由数据图可知，未知液在3.5、4.5附近分别有峰，说明未知液中含有苯和甲苯。苯的保留时间比甲苯的短，因此测定混合未知液时，先出峰的是苯，后出峰的是甲苯。

3.定量分析

(1)工作曲线的绘制

苯、甲苯标准溶液与峰面积数据记录表如下：

苯与甲苯混合溶液浓度(μL/mL)

2.5

5.0

7.5

10.0

苯峰面积

4954144

5782735

6905262

7190171

甲苯峰面积

8477594

979871912018780

以峰面积对苯浓度作工作曲线

由于第三个点的偏差过大，导致线性关系较差，因此舍去第三个点进行线性拟合，R2为0.99651。

以峰面积对甲苯浓度作工作曲线

由于第三个点的偏差过大，导致线性关系较差，因此舍去第三个点进行线性拟合，R2为0.99602。

(2)测定未知液浓度

峰类型

苯

甲苯

峰面积

6181325未知液浓度(μL/mL)

6.5

6.6

根据标准曲线可测得苯的浓度分别为6.5μL/mL，甲苯的浓度为6.6μL/mL。

六、结果与讨论

1.因为实验中待测溶液的组分只有苯和甲苯两种物质，组分比较简单。只要在实验过程中，严格控制且定量进样，就能采用操作、计算简便的标准曲线法得出准确的实验结果。若采用归一化法或内标法，虽然能得到准确更高的实验结果，但由于实验操作、计算复杂，不能快速分析，故实验中采用标准曲线法作为定量的方法

2.最佳色谱条