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压力超负荷诱导左室舒张功能减退的分级研究及机制探讨

项目负责人：李新天津医科大学胸心外科学

研究背景舒张性心力衰竭（diastolicheartfailure，DHF）具有心力衰竭的症状或体征收缩功能正常（LVEF＞50%）舒张功能异常

研究背景舒张功能减退（DHD）由于心肌松弛性或/和顺应性受到影响，出现舒张期延长、减慢、或者不完整，即为舒张性心功能减退（diastolicheartdecrease），可逐渐发展成为DHF。

研究背景——左室舒张功能的分级MayoClinic超声心动图实验室使用和纽约心脏病协会（NYHA）心功能相似的分级系统，对DHD进行了分级：1级：主动松弛功能受损型2级：假性正常化型3级：可逆性限制性充盈异常型4级：不可逆性限制性充盈异常型

研究背景在基础研究中，疾病动物模型的建立有益于疾病发病机制和诊疗手段的探讨。经查阅文献，关于心脏舒张功能的基础研究中，大多注重于DHF模型的建立和研究，而对DHD分级状态的动物模型尚没有报道。而且缺少评价左室舒张功能的无创方法。

研究目的探索建立左室舒张功能减退级别动物模型的方法探索应用超声检查对大鼠的左室舒张性心功能不全进行分级探讨不同级别舒张功能不全与心肌细胞内钙循环异常的关系

研究内容1、环缩腹主动脉，增加左室压力负荷，诱导大鼠左室舒张功能进行性减退；2、术后不同时间点进行血流动力学检测，评价左室主动松弛性和被动顺应性；3、超声心动图检测大鼠左室舒张功能，并与血流动力学进行相关性分析；4、RT-PCR法检测SERCA2a和PLB在不同级别左室舒张功能不全心肌细胞的表达水平。

研究流程和方法

Wistar大鼠80只对照组40只游离腹主动脉不缩窄实验组40只游离腹主动脉并缩窄50%—60%4周取样本量的1/4超声检查→血流动力学检查→处死→留取心肌标本剩余样本量的1/3同前处理剩余样本的1/2同前处理2周6周取样本量的1/4超声检查→血流动力学检查→处死→留取心肌标本剩余样本量的1/3同前处理剩余样本量的1/2同前处理剩余样本同前处理剩余样本同前处理8周

心肌肌浆网膜钙离子泵(SERCA2a)和受磷蛋白(PLB)表达的测定组织匀浆提取RNARNA逆转录合成第一链cDNART-PCRPLB实时定量引物序列：F：CTTTGTCTTCCTGGCATCAR：AGGTTCTGGAGGTTCTGACGSERCA实时定量引物序列：F：TCTGACTTTCGTTGGCTGTGR：GCCTTTGTTATCCCCAGTGA大鼠GAPDH实时定量引物序列：F：GCAGTTGGTTGGAGCAAR：ATGCCGTGGATACTTGGA

结果

左室压力负荷增高在各实验组稳定存在，各时间点实验组的平均动脉压（MAP）和左室收缩压（LVSP）高于对照组结果——血流动力学检测

结果——血流动力学检测

舒张功能指标出现进行性改变：2周时，实验组-dp/dtmax下降（P＜0.05）LVEDP无差异4周时，实验组-dp/dtmax明显下降（P＜0.01）LVEDP升高（P＜0.05）6周时，实验组-dp/dtmax明显下降（P＜0.01）LVEDP明显升高（P＜0.01）8周时，实验组-dp/dtmax明显下降（P＜0.01），LVEDP明显升高（P＜0.01）。结果——血流动力学检测

结果——超声检查

舒张功能指标进行性变化实验组和对照组相比：2周时，Em减慢（P＜0.05）4周时，E增快（P＜0.05），Em减慢（P＜0.05）；E/Em增大（P＜0.05）6周时，E增快（P＜0.05）；Em明显减慢（P＜0.01）