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发酵工程试验报告

产淀粉酶菌株的筛选

姓 名：××

班 级：生物技术

学 号：××指导教师：×××

产淀粉酶菌株的筛选

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〔长春师范大学生命科学学院生物技术〕

【摘要】为筛选产淀粉酶的高产菌株,利用淀粉水解圈作为筛选模型,从学校四周土壤中筛选得到产淀粉酶力量较强的细菌。对其酶活力进展测定,最终得到产淀粉酶的高产菌株。

【关键词】淀粉酶;水解圈;酶活力;高产菌株

ScreeningofStrainsProducingStarch

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(TechnologyofBiologicalLifeScienceCollegeofChangchunNormalUniversity)

[Abstract]forthehigh-yieldstrainswerescreenedforamylase,thestarchhydrolysiscircleasamodelforscreening,screeningfromtheschoolnearthesoilproducedamylaseabilityofthebacteria.Determinationoftheenzymeactivity,highyieldstraineventuallyproducedamylase.

[Keywords]Amylase;Hydrolysiscircle;Enzymeactivity;Producingstrain

前言：生活中的微生物无处不在，某些微生物给人们带来困扰，但更多的微生物对我们人类有必不行少的作用。淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类的总称,广泛存在于动植物和微生物中,是最早实现工业生产并且迄今为止用途最广、产量最大的酶制剂品种。特别是20世纪60年月以来,由于酶法生产葡萄糖,以及用葡萄糖生产异构糖浆的大规模工业化,淀粉酶的需要量越来越大,几乎占整个酶制剂总产量的50%以上。微生物的很多种类都能产生淀粉酶。淀粉酶种类繁多,特点各异且用途广泛。由于淀粉酶的用途广泛,各国在对淀粉酶产生菌的筛选方面都做了大量的争论工作,目前所得淀粉酶活力最高可到达260U/mL左右。虽然不少微生物能产生淀粉酶,但适合商业生产需要的菌株仍旧很少,在淀粉酶生产过程中选择适合的菌株是最重要的前提条件。本文以土壤作为原料,从中筛选出具有产淀粉酶力量的动身菌株,并对所得的动身菌株进展酶活力测定,使其给工业生产带来经济效益做大量的准备工作。

材料与方法

器材

?培育皿、量筒、试管、滴管、吸水纸、烧杯、移液管、三角瓶、酒精灯、玻璃棒、接种环、镊子、天平、滤纸、pH试纸、试管架、容量瓶等。

?恒温培育箱、高温灭菌锅、无菌操作台、控温摇床、分光光度计、离心机。

?棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、称量纸、试管架、药匙、吸耳球、镊子、酒精棉、废液瓶、胶塞、火柴。

试剂

?牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、NaCl、蒸馏水、1mol/LNaOH、1mol/LHCl、无菌水、95%乙醇、75%酒精、酵母膏、KH2PO4、碘液、淀粉溶液〔0.5%〕、蔗糖溶液〔1%〕、3,5

—二硝基水杨酸试剂〔DNS试剂〕、酒石酸钾钠、结晶酚、亚硫酸钠、磷酸缓冲液

〔0.2mol/L,pH6.8〕、6mol/LNaOH。

牛肉膏蛋白胨培育基、固体淀粉培育基、种子培育基、发酵培育基。

菌种土壤稀释液

操作步骤

培育基的配制

操作流程：

称量→溶解→调整pH→分装→加棉塞→包扎→灭菌→摆斜面

操作步骤：

称量药品：按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏和蛋白胨可分别放在小烧杯或外表皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯。蛋白胨极易吸潮，故称量时要快速。

加热溶解：在烧杯中参加少于所需的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻璃棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。假设配制固体培育基，则将称好的琼脂放入已溶解的药品中，再加热溶化，在此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最终补充所失水分。

调pH：用pH试纸检测培育基的pH值，假设pH偏酸，可滴加1mol/LNaoH，边加边搅拌，并随时检测，直至到达所需pH范围。假设偏碱，则用１mol/lHCL进展调整。留意pH值不要调过头，以免回调而影响培育基内各离子的浓度。

分装：按试验要求，可将配制的培育基分装入试管或三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培育基沾在管口或瓶口上而造成污染。分装量：固体培育基约试管高度的1/5；分装入三角瓶内的以不超过其容积的一半为宜，半固体培育基以试管高度的1/3为宜。

加棉塞：培育基分装完毕后，在试管口和三角瓶口塞上用一般棉花〔非脱脂棉〕制作的