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IEX-1与CLU相互作用的验证的开题报告

1.引言：

CLU(Clusterin)是一种广泛分布于体内各个组织的分泌性蛋白质。它通过广泛的受体表达，能够在细胞凋亡、炎症反应或者其他压力之下进行细胞保护。CLU同时也具有调节胆固醇途径，细胞糖醛化和凋亡调节等多种功能。而IEX-1(ImmediateEarlyResponseProteinX-1)作为一种早期应答蛋白，参与了细胞应激反应、凋亡和免疫调节等多种生物学功能。同时，它也能够和多种生物分子相互作用，从而调节相应生物过程。但目前关于IEX-1和CLU相互作用的研究还非常有限，因此本文旨在通过合成IEX-1和CLU蛋白并通过一系列生物学技术方法对它们的相互作用进行验证，最终探究两种蛋白相互作用的生物功能机制。

2.研究目的：

正确认识IEX-1和CLU的相互作用关系在细胞凋亡、炎症反应和其他压力下细胞生存能力的调节中具有非常重要的意义，因此我们的研究目标为：

（1）在细胞质中构建IEX-1和CLU的结构模型；

（2）通过大量CD和SPR等生物技术手段来验证这两种蛋白是否具有相互作用能力；

（3）通过分离、纯化、定量分析等生物学方法来了解它们的结构状态；

（4）通过免疫印迹、IF、细胞实验等技术对其功能进行进一步研究，以揭示其生物学功能机制。

3.研究计划：

3.1实验原料：

pET-28a-IEX-1构建载体、pET-28a-CLU构建载体、BL21（DE3）菌株、IEX-1和CLU重组质粒、超滤器等。

3.2实验流程：

（1）构建IEX-1和CLU的表达载体。

（2）将重组质粒在大肠杆菌细胞中大量表达并通过超滤器蛋白质纯化。

（3）通过CD等手段检测IEX-1和CLU的二级结构以及蛋白是否正确折叠。

（4）通过SPR等方法进行蛋白质相互作用的测定。

（5）通过免疫印迹法或IF染色法对样品的结构和相关蛋白质结合状态进行检测。

（6）对相互作用的样品进行细胞实验，观察相应的作用机制。

3.3实验难点：

（1）IEX-1和CLU二级结构的分析。

（2）蛋白质充分折叠。

（3）对质粒的充分表达以及还原剂的充分应用。

（4）SPR的数据准确度和可重复性。

（5）通过IF和免疫印迹等方法确定结构和相互作用情况的可靠性。

4.预期结果：

通过本文所研究的生物学方法，将可以实现IEX-1andCLU的基本结构探究以及相互作用机制的阐明。本研究结果将拓展已有研究的观点，进一步增加对于IEX-1和CLU生物学功能的认识。这对于找到涉及IEX-1和CLU的疾病及其治疗方法具有重大的价值。