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百日咳实验室检测技术指南

为指导各级医疗机构和其他检测机构规范开展百日咳实验

室检测工作，准确识别百日咳确诊病例，确保检测质量，提高检

测效率，制定本指南。

一、样本采集

（一）采样人员要求。从事标本采集的技术人员应经过生物

安全培训，熟练掌握标本采集方法和操作流程。

（二）样本采集。样本种类主要有鼻咽拭子、鼻咽吸取液、

血清等。卡他期或痉咳期早期患者建议采集鼻咽拭子，持续咳嗽

2—3周或以上的患者建议开展血清学检测。

二、实验室检测

（一）百日咳鲍特菌培养。

1.菌株分离培养。细菌培养优先采集鼻咽拭子，其次为鼻咽

吸取液。采集鼻咽拭子后，可直接接种培养基，也可经增菌培养

后接种，增菌可提高培养阳性率。培养基一般为含选择性添加剂

的鲍-金培养基（B—G培养基）或木炭琼脂培养基（R—L培养

基）平板。如不能立即接种，需将鼻咽拭子放入转运管中，4℃

冷藏运送至实验室，分区划线接种后35℃—37℃培养，每日检查

有无疑似菌落，连续观察3—7天，若无任何细菌生长痕迹，第7

天可报告百日咳鲍特菌阴性。若有疑似菌落生长，及时挑取疑似

菌落，在不含选择性添加剂的B—G培养基或R—L培养基平板

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上进行纯菌分离培养。

2.结果判定。培养到百日咳鲍特菌，结合临床表现可诊断为

百日咳确诊病例。可通过观察菌落形态、革兰染色镜检、生化反

应等进行菌落种属鉴定，也可采取特定靶基因核酸检测、基因组

测序或质谱检测等方式进行种属鉴定。

（二）百日咳鲍特菌核酸检测。

1.提取DNA。核酸检测优先采集鼻咽拭子，其次为鼻咽吸取

液，也可使用培养接种后的拭子进行核酸检测。为提高核酸检测

阳性率，建议单独采样。将拭子在无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液

中洗脱，离心去除上清液，沉渣提取DNA，用于核酸检测；如不

能立即提取，可—70℃保存备用。

2.结果判定。国内常用实时荧光PCR技术检测百日咳鲍特菌。

核酸检测结果阳性，结合临床表现可诊断为百日咳确诊病例。阴

性结果应进一步排除假阴性，假阴性的可能原因包括：样本质量

差；样本采集时间过早或过晚；样本保存、运输和处理不当；其

他原因如PCR抑制等。

（三）血清学检测。

1.适用范围。百日咳鲍特菌血清学检测不适用于婴幼儿、1

年内接种含百日咳成分疫苗和既往感染的个体。

2.检测方法和质控。常用的血清学检测方法是酶联免疫吸附

试验（ELISA），以双份血清或单份血清的PT—IgG抗体为检测

指标。检测试剂盒结果PT—IgG抗体浓度数据可溯源至国际标准

单位。每次检测需同时检测试剂盒提供的阴性和阳性质控品。

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3.结果判定。对于百日咳疑似病例或临床诊断病例，具有以

下任一项者，可明确诊断：单份血清百日咳鲍特菌PT—IgG抗体

浓度超过诊断急性感染的标准阈值（试剂盒推荐阈值）；恢复期

血清PT—IgG抗体滴（浓）度较急性期呈4倍及以上升高。

（四）全基因组测序。

全基因组测序参照国家致病菌识别网《细菌纯培养物二代基

因组测序操作规范》《细菌纯培养物二代加三代基因组测序操作

规范》执行。

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