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动物和动物产品沙门氏菌检测方法

1范围

本文规定了动物和动物产品中沙门氏菌（Salmonella）的检验程序、样品采集、样品处理、细菌

分离、细菌PCR检测以及实时荧光定量PCR检测方法。

本文件适用于动物和动物产品中沙门氏菌的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款，其中，注日期的引用文，

仅该日期对应的版本适用于本文；不注日期的引用文，其最新版本（包括所有的修改版）适用本文

。

GB4789.4食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验。

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

NY/T1948兽医实验室生物安全要求通则。

3术语和定义

本文没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文。

4.1BPW：缓冲蛋白胨水（BufferedPeptoneWater）

4.2CFU：菌落形成单位（Colony-FormingUnit）

4.3DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid）

4.4EDTA：乙二胺四乙酸（EthyleneDiamineTetraaceticAci）

4.5MSRV：改良半固体RV培养基（ModifiedSemi-SolidRappaport-VassiliadisMediumBase）

4.6PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

4.7RT-qPCR：实时荧光定量PCR（realtimequantitativePCR）

4.8r/min：转/分钟（RevolutionsPerMinute）

2

4.9RVR10：沙门氏菌选择性增菌液体培养基（Rappaport-VassiliadisR10Broth）

4.10TAE：三羟甲基氨基甲烷-乙酸-乙二胺四乙酸（Tris-AceticAcid-EthylenediaminetetraaceticAcid）

4.11XLT4：木糖-赖氨酸-硫酸四癸钠琼脂（XyloseLysineTergitol4AgarBase）

5培养基与试剂

除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。

5.1BPW：见附录A.1。

5.2RVR10：见附录A.2。

5.3MSRV：见附录A.3。

5.4XLT4：见附录A.4。

5.51.2%琼脂糖凝胶：见附录A.5。

5.6PCRMasterMix。

5.7PCRMasterMix(PremixExTaqTM)。

5.8沙门氏菌诊断血清。

5.9生化鉴定试剂盒。

6主要设备和耗材

6.1冰箱（冷藏温度为2℃～8℃）。

6.2恒温培养箱（37℃±1℃、42℃±1℃）。

6.3高压灭菌锅（121℃、103kPa）。

6.4恒温摇床（180r/min、37℃±1℃）。

6.5无菌采样袋（120mm×180mm、450mm×550mm）。

6.6无菌培养皿（直径90mm）。

6.7无菌接种环（1μL）。

6.8无菌棉签（10cm）。

6.9均质器。

6.10无菌均质袋、无菌均质杯。

6.11电子天平（感量0.1g）。

6.12过滤装置及滤膜（0.22μm）。

3

6.13微量移液器（200μL、1000μL）。

6.14离心机（最高转速≥12000r/min）。

6.15离心管（1.5mL，10mL）。

6.16干式恒温金属浴。

6.17