岛津LC-20AD液相使用说明.docx

高效液相色谱仪操作规程

高效液相色谱仪操作规程

原理：高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几局部组成。储液器中的流淌相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流淌相，被流淌相载入色谱柱(固定相)内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的安排系数，在两相中做相对运动时，经过反复屡次的吸附-解吸的安排过程，各组分在移动速度上产生较大的差异，被分别成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。

仪器：

硬件名称LC-20AD高效液相色谱仪，分硬件与软件两个局部，硬件：DGU-20A、LC-20AD、SIL-20A、SPD-20A、CTO-20AC五个模块，软件labsolutions工作站。

硬件

脱气机、泵、自动进样器、托盘、柱温箱每天来

1、开机〔按钮左下角〕

2、流淌相放好。流淌相

水相：一般纯化水、超纯水、哇哈哈、条件好屈臣氏，水相每天现配最好。有机相：色谱级试剂

上机之前流淌相先过滤〔0.45μm以下滤膜〕，然后超声10-20min。

补充：正相色谱法承受极性固定相〔如聚乙二醇、氨基与腈基键合相〕；流淌相为相对非极性的疏水性溶剂〔烷烃类如正已烷、环已烷〕，常参加乙醇、异丙托盘上五根管道，ABCD用于放流淌相，一般状况四根用两根A-B、A-C，岛津仪器最好A与其他搭配，便于设参数，具体流淌相中药依据药典。另一个无标识为自动进样器清洗液，一般是50%甲醇水〔反相系统〕，正相系统则与流淌一样，正反相转化①先用流淌相过①

补充：正相色谱法承受极性固定相〔如聚乙二醇、氨基与腈基键合相〕；流淌

相为相对非极性的疏水性溶剂〔烷烃类如正已烷、环已烷〕，常参加乙醇、异丙

醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调整组分的保存时间。常用于分别中等极性和极性

醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调整组分的保存时间。常用于分别中等极性和极性

较强的化合物〔如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等〕。

较强的化合物〔如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等〕。

反相色谱法：一般用非极性固定相〔如C18、C8)；流淌相为水或缓冲液，常参加甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调整保存时间。适用于分别非极性和极性较弱的化合物。RPC在现代液相色谱中应用最为广泛，

据统计，它占整个HPLC应用的80%左右。

3、拧松黑色排气阀。

拧松黑色排气阀，之后点击两次purge，分别为泵单元上按钮与自动进样器上purge按钮，注：泵单元上按钮点击时，流淌相管道用的哪些，purge那些，可于工作站上面设置。比方用的A与B，先purgeA，之后purgeB。purge之后肯定要拧紧黑色排气阀，非purge下，拧紧，否则不出峰。

关于泵单元，一般泵的压力范围0.2MPa,压力故障大局部是由于单向阀造成的，清洗单向阀〔90%水+10%的甲醇超声10-20min，纯的异丙醇10-20min，再用90%水+10%的甲醇超声10-20min，实在不行可用5%的稀硝酸替代异丙醇那一步。〕泵最大流速10ml/min,40MPa。

单向阀上下左右共计四个，下面进，上面出，之间是泵头，再上面是压力传感器，下面有个在线过滤器，黑色即为排气阀，这一次purge，流速8ml/min,3minstop。什么时候purge？

滤头离开液面〔否则可能有气泡进来〕

每天分析之前〔温差变化，可能有气泡〕

4、接柱子、上样品

流淌相-脱气机-低压阀-入口单向阀-泵头-出口单向阀-压力传感器-拧松-purge-拧紧-混合器-自动进样器

首先流淌相到混合器，混合，混合器在柱温箱左边，柱温箱可降温，温度掌握范围最低温度为环境温度减10①，报警系统其他单元在右下角感应，柱温箱则是浓度报警，可翻开，擦拭一下。

混合器混合后，到自动进样器。自动进样器有两个托盘，分别为0号架，1号架，

一般用1号架，共105孔，孔放1.5ml瓶子，一般液体放一半即可，瓶盖可清洗，垫片是一次性，垫子一面深色与里面，特别材料，耐酸耐腐蚀。架子往里面推有声音，才是推动去，正常状况下，自动进样器工作状态门要关着〔否则仪器显示doorisopen〕。

接柱子：每根柱子有方向，箭头，即流淌相流淌方向。每天做完冲柱子〔10%甲醇水1ml/min0.5h+纯甲醇1ml/min0.5h为最低要求〕，主子是耗材，轻拿轻放，长期不用，冲一遍拿下，两头堵住，放于柱箱中。

样品通过柱子到流淌池，氘灯供给能量，到紫外检测器分别，分别后与工作站显示图谱，废液进废液瓶。

氘灯最大使用时间2023h,检测器最大波长700nm。

软件〔labsolutions工作站〕