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机械搅拌式生物反应器悬浮培养293T细胞生产慢病毒的工艺
汇报人：
2024-01-16
CATALOGUE
目录
引言
机械搅拌式生物反应器概述
293T细胞悬浮培养技术
慢病毒生产工艺流程
关键操作参数对产品质量影响分析
设备选型及操作注意事项
总结与展望
引言
01
随着基因治疗和细胞治疗的发展，慢病毒作为重要的基因转移载体，在生物医学研究中具有广泛应用。293T细胞是常用的慢病毒包装细胞系，传统的贴壁培养方式存在扩展性差、操作繁琐等问题，因此悬浮培养成为一种有潜力的替代方案。
悬浮培养293T细胞生产慢病毒的需求
机械搅拌式生物反应器能够提供均匀的环境条件，促进细胞生长和病毒生产。此外，该反应器易于放大和实现自动化控制，有利于提高慢病毒生产的效率和一致性。
机械搅拌式生物反应器的优势
基因治疗和细胞治疗的发展
01
慢病毒作为基因转移载体，能够将外源基因高效、稳定地整合到靶细胞中，因此在基因治疗和细胞治疗中具有重要作用。随着这些治疗方法的不断发展，对慢病毒的需求也在不断增加。
疫苗研发和生产的需要
02
慢病毒可以作为疫苗生产的工具，用于生产预防性或治疗性疫苗。通过悬浮培养293T细胞生产慢病毒，可以提高疫苗生产的效率和产量，满足大规模接种的需求。
生物医学研究的工具
03
慢病毒在生物医学研究中具有广泛应用，如基因功能研究、疾病模型建立等。通过悬浮培养293T细胞生产慢病毒，可以提供大量的研究用病毒，促进生物医学研究的发展。
机械搅拌式生物反应器概述
02
机械搅拌式生物反应器是一种通过搅拌桨旋转产生流体动力，使细胞、培养基和气体充分混合，从而提供细胞生长所需环境条件的设备。
主要由搅拌系统、温控系统、供气系统、检测系统、控制系统等部分组成。
结构
原理
提供均匀的环境条件
通过搅拌作用，使细胞在反应器内均匀分布，从而获得均匀的营养物质、氧气和pH值等环境条件。
良好的传质与传热性能
机械搅拌式生物反应器具有较高的传质和传热系数，有利于细胞生长和代谢产物的积累。
易于放大与自动化：该类反应器设计成熟，易于实现放大生产和自动化控制。
剪切力问题
高速旋转的搅拌桨可能产生较大的剪切力，对某些敏感细胞造成损伤。
清洗与消毒难度
机械搅拌式生物反应器的内部结构较为复杂，清洗和消毒相对困难。
病毒生产
利用293T细胞等悬浮细胞系生产病毒，如慢病毒等。通过控制细胞生长条件和病毒感染参数，可获得高滴度的病毒颗粒。
悬浮细胞培养
适用于各种悬浮细胞的培养，如293T细胞等。通过优化搅拌速度和培养基成分，可实现高密度细胞培养。
细胞代谢产物生产
适用于利用悬浮细胞生产各种生物活性物质，如蛋白质、抗体、酶等。通过优化培养条件和分离纯化技术，可实现高产率和高纯度的目标产物生产。
293T细胞悬浮培养技术
03
293T细胞系具有高效的转染能力，适用于慢病毒生产。
高效转染
悬浮生长
稳定性好
293T细胞在适当的培养条件下可以悬浮生长，便于大规模培养。
293T细胞在悬浮培养过程中能保持较好的遗传稳定性和生长特性。
03
02
01
细胞复苏与扩增
悬浮培养适应
培养基选择与优化
细胞密度与传代
01
02
03
04
从冻存管中取出293T细胞，进行复苏和扩增培养。
将贴壁生长的293T细胞逐渐适应悬浮培养环境。
选择适合293T细胞悬浮培养的培养基，并根据需要进行优化。
控制细胞密度，及时进行传代培养，以保持细胞活力。
慢病毒生产工艺流程
04
选择适合293T细胞生长的培养基，如DMEM或RPMI-1640，添加适量胎牛血清和双抗。
细胞培养基
细胞株
辅助质粒
转染试剂
复苏并扩增293T细胞，确保细胞状态良好，无污染。
准备慢病毒包装所需的辅助质粒，如psPAX2和pMD2.G。
选择高效的转染试剂，如Lipofectamine2000或FugeneHD。
将293T细胞以适当密度接种于生物反应器中，确保细胞均匀分布。
将携带目的基因的慢病毒表达质粒与辅助质粒共同转染入293T细胞。
在转染后适当时间，更换新鲜培养基以支持病毒扩增，同时添加必要的营养因子。
定期取样检测病毒滴度和细胞状态，确保病毒扩增过程顺利进行。
细胞接种
转染
病毒扩增
过程监控
在病毒扩增达到高峰时，收集细胞培养上清液，即为粗病毒液。
病毒收获
通过超速离心、凝胶电泳或亲和层析等方法对粗病毒液进行纯化，去除杂质和细胞碎片。
病毒纯化
将纯化后的病毒液分装并保存于-80℃冰箱中，避免反复冻融。
病毒保存
对纯化后的病毒液进行质量检测，包括滴度测定、无菌检测和安全性评估等。
质量控制
关键操作参数对产品质量影响分析
05
03
温度控制策略
通过精确的温度控制系统，将反应器内温度维持在适宜范围内，以确保产品质量和产量。
01
温度波动对病毒蛋白表达的影响
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