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动物细胞氧化应激活性氧(ROS)光泽精化学发光法定量检测试剂盒说明书
一、检测原理
动物细胞氧化应激活性氧(ROS)光泽精化学发光法定量检测试剂盒是血液卵磷脂胆固醇乙酰
转移酶(LCAT)活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过非界面性的水溶性单体底物，在磷脂
酶或乙酰转移酶的水解下，其释放的产物发生吸收峰值的变化，即采用比色法来测定血液样
品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各
种血液样品(动物、人体等)卵磷脂胆固醇乙酰转移酶的活性检测。产品严格无菌，即到即用，
操作简捷，性能稳定。
二、样品收集、处理及保存方法
血液样品分为耳静脉采血、颈静脉采血、前腔静脉采血、心脏采血、翅静脉采血，应根据
工作实际选择合适的采血方式。全血样品是在样品中加抗凝剂，可用0.1%肝素、阿氏液、
3.8%枸橼酸钠。我们通常做免疫效果抗体检测需要血清，血液在采集后室温静置2小时以上，
冬季需要加温，高速离心，或者4度过夜，抽取血清。
注意事项：
1每份样品一定按要求采够量，比如禽血清一般要求不少于0.5毫升，猪血清一般要求不少
于1毫升。
2血清样品要清亮、无溶血、无变质。
3样品容器上贴详细标签
4尽量防止或避免反复冻融。
组织样品：采集的每个组织块要单独放一个已消毒的容器内，贴详细标签，防止组织间相
互污染，注意消毒，以防散毒。做好个人防护。
分泌物和排泄物：常用的就是禽流感咽喉拭子和泄殖腔拭子的采集。容器中首先放入含有
抗菌素的PH值为7.0-7.4的PBS液，原则上咽喉、泄殖腔拭子分别放置。抗生素的浓度为青
霉素2000IU/ml,链霉素2mg/ml,庆大霉素(卡那霉素)50ug/ml,制霉菌素10000IU/ml,粪便和泄
殖腔拭子所用的抗生提高5倍。加入抗生素后应调整PH值至7.0-7.4。
粪便样品：常用的是禽流感野鸟粪便的采集，注意样品一定为新鲜粪便。
皮肤样品
三、储存条件
14℃或-20℃
四、试剂盒内容
标准品
样本稀释液
检测抗体-HRP
20×洗涤缓冲液
底物A
底物B
终止液
说明书
自封袋
五、操作方法
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封
袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL;空白孔不
加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶
(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴
锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去
洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
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