动物胚胎工程.pptVIP

3.胚胎分割在进行胚胎切割时，先将发育良好的胚胎移入含有操作液滴的培养皿中，操作液常用杜氏磷酸缓冲液，然后在显微镜下用切割针或切割刀把胚胎一分为二。4.分割胚的培养为提高半胚移植的妊娠率和胚胎利用率，分割后的半胚需放入空透明带中或者用琼脂包埋移入中间受体在体内或直接在体外培养。5.分割胚胎的保存和移植胚胎分割后可以直接移植给受体，也可以进行超低温冷冻保存。为提高冷冻胚胎移植后的受胎率，分割的胚胎需要在体内或体外培养到桑椹或囊胚阶段，再进行冷冻。胚胎分割的方法（1）显微针分割法该法适用于卵裂球阶段的胚胎。操作时在显微操作仪下将胚胎固定，用玻璃针在透明带上作一切口，将卵裂球从透明带中移出，并吹吸卵裂球使之离散，将其装入2个预先准备好的空透明带内，进行移植。该方法具有较高的同卵双生率，但操作程序复杂。（2）显微刀分割法该法适用于对桑葚胚和早期囊胚进行分割。在显微操作仪下固定胚胎，用特制显微刀片将胚胎均匀一分为二，分别装入空透明带中，进行移植。（3）酶软化透明带后显微分割法用0.5%的链霉蛋白酶软化胚胎透明带,若是紧密化胚胎(如桑椹胚),则需在无钙、镁的平衡盐溶液中处理20分钟,使胚胎去紧密化，将胚胎固定，把将针置于欲分割的胚胎上面,使其与胚胎呈30度角,对准胚胎的正中平分线徐徐下压，即可将一个胚胎分割成两半。（4）酶消化去透明带后分割法用0.25%～0.5%的链霉蛋白酶去掉胚胎透明带,然后用显微玻璃针或微手术刀将裸胚一分为二。（5）徒手分割法徒手分割法主要适用于分割体积较大的胚胎，其优势在于可以不用显微操作仪。在立体显微镜下，用止血钳夹住切割刀片，将透明带切开一部分，再用直径略小于胚胎的毛细管吹吸几次，胚胎从透明带中脱出。手持玻璃针自上而下对称切割裸胚。这种方法多用于分割桑椹胚和囊胚。该方法操作简便、快速，便于生产应用，但要求要有较为灵巧的操作技能。（三）胚胎分割技术的进展哺乳动物的胚胎分割技术在近20年取得了较大进展，主要表现为操作方法趋于简化，效率提高。在牛的胚胎移植生产中，胚胎分割已用于提高胚胎移植的总受胎率和克服异性孪生不育。此外，胚胎分割取样已用于胚胎的性别鉴定和转基因阳性胚胎的早期选择。应用：1.与核移植相结合，在实验动物方面可以培育出超纯系动物2.对小鼠、家兔、山羊等实验动物胚胎分割后，可以获得同卵孪生后代3.对濒临灭绝的珍惜动物也可以采用这项新技术进行抢救方法：1.用玻璃管拉成细丝，再制成切割刀，在显微操作仪的机械手上施行分割或分散胚胎。2.如条件较差，可徒手制成玻璃细丝，成为切割刀，在解剖镜下徒手切割。显微操作仪切割徒手切割四.胚胎分割目前存在的问题1.初生重低2.遗传一致性不同3.同卵多胎的局限性归纳小结工程之五：体外受精在实验动物中进行体外受精，一般都着眼与基础理论研究性质，如为受精生物学、发育生物学和繁殖学的基础研究提供实验模型。由于卵子和精子的受精过程是在实验室中完成，故通过这一技术而产下的动物又称为“试管动物”，如“试管鼠”、“试管猪”、“试管婴儿”等。体外受精技术的发展简史

动物报道时间报道者兔小鼠大鼠人牛猪恒河猴狒狒绵羊山羊狨猴马猫犬19591968197419781982198619841984198519851988199019701976ChangWhittinghamToyodaSteptoeBrackettChengBavisterBamaceda花田章花田章LopataZhangHammerMahi1、发展简史1951年，美籍华人张明觉和澳大利亚学者Austin分别发现了精子获能（capacitation）现象，使动物体外受精研究进入了新纪元。1959年张明觉在世界上首先获得了体外受精的的哺乳动物—试管兔，推动了体外受精研究工作的开展。1978年首例人类试管婴儿路易斯·布朗（LouiseBrown）诞生。直到20世纪80年代，动物的体外受精技术才取得突破，尤其是牛的体外受精技术发展迅速。1981年Brackett等用体内成熟卵母细胞获得试管牛犊，随后Hanada等（1985）获得绵羊和山羊体外受精后代，并于1986年获得体外成熟卵母细胞体外受精的第一头犊牛。我国学者卢克焕（1987）在爱尔兰获得全体外过程的试管牛犊。（1）研究哺乳动物配子发