细菌染色技术.ppt

细菌染色技术;细菌染色措施;常用的染色措施;常用燃料;染色措施的分类;染色过程;细菌基本形态构造;标本处理;标本处理注意事项;.;一般染色法;革兰染色法（GramStain）;一、原理

细菌经结晶紫初染染成蓝色。G+菌细胞壁肽聚糖层数多，且肽聚糖为空间网状构造，再经乙醇脱水，网状构造更为致密，染料复合物不易从细胞内漏出，仍为蓝色。而G-菌细胞壁脂类含量多，肽聚糖层数少，且肽聚糖为平面片层构造，易被乙醇溶解，使细胞壁通透性增高，结合的染料复合物轻易泄漏，细菌被脱色为无色，再经石炭酸复红稀释液复染成红色。;结晶紫初染;用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫(crystalviolet)。

媒染剂的作用是增长染料和细胞之间的亲和力或附着力，即以某种方式协助染料固定在细胞上，使不易脱落。

不一样类型的细胞脱色反应不一样，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95％的酒精(ethanol)。

复染液也是一种碱性染料，其颜色不一样于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不一样于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，常用的复染液是番红。;三、成果:

阳性菌——紫色

阴性菌——红色

;

固定初染媒染脱色复染

革兰氏阳性菌，用符号“G+”或“GP”

（Gram’sPositive）表达。

革兰氏阴性菌，用符号“Gˉ”或“GN”

（Gram’sNegative）表达。;四、影响原因;2.染液

染液用完后应及时盖上盖子，以免挥发影响染色效果

3.细菌原因

被检菌的培养条件、培养基成分、菌龄的不一样等原因会影响染色成果，如培养时间过长革兰阳性菌也许染成阴性，因此被检菌的菌龄一般最佳在18~24h之内。

某些细菌存在染色困难、不易脱色等状况，也许会出现染色不均，阴阳不定的现象。;五、临床意义;.;革兰氏阳性葡萄球菌例子(金黄色葡萄球菌x1000);革兰氏阳性链球菌例子;革兰氏阴性杆菌例子(大肠杆菌x1000);革兰氏阴性弧菌例子;革兰氏阳性产芽孢杆菌例子;革兰氏阳性短杆菌例子(李斯特菌x1000);革兰氏阴性弯曲菌例子;革兰氏阳性棒状杆菌例子;抗酸染色法;

涂片固定

酸性复红初染

3%盐酸酒精脱色

美蓝复染

镜检;染色过程中的细菌颜色变化：;三、成果:

抗酸菌———红色；

非抗酸菌——蓝色。;抗酸染色注意事项;??抗酸染色的意义：

用以鉴别抗酸菌（如结核杆菌和麻风杆菌）和非抗酸菌。;荧光染色法;二、环节：;三、成果:

阳性—明亮橘黄色荧光；

阴性—无荧光

;三、临床应用：

荧光染色法敏感性强，效率高并且轻易观测成果，在临床细菌鉴定中有很大的实用价值。重要用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等的检测。

四、注意事项：

荧光染色法可以作为分枝杆菌的初筛试验，初筛阳性的须做抗酸染色确认。;特殊构造染色法;细菌的某些基本构造如细胞壁、核质、胞浆颗粒和特殊构造如荚膜、芽孢、鞭毛等，用一般染色法不易着色，须用某些特殊染色法才能染上颜色。特殊染色法重要有荚膜染色法、鞭毛染色法、芽孢染色法、异染颗粒染色法等。这些染色法不仅能使特殊构造着色，还可使特殊构造染成与菌体不一样的颜色，有助于观测和区别。;负染色法

;墨汁染色法;.;.;在细菌检查工作中，除异染颗粒染色法较常用外，由于其他特殊构造染色法操作费时，费用较高、染色过程规定非常严格，而一般染色法虽不能使特殊构造自身着色，但菌体着色后，荚膜和芽孢部分由于不着色也能显示出来，再加上特殊染色法比较复杂，故平常工作中较少使用这些特殊构造染色法。;.;特殊染色;质量控制;常见细菌图例;无乳链球菌;化脓链球菌;缺陷乏养菌;脑膜炎奈瑟氏菌;淋病奈瑟菌;产单核李斯特菌;红斑丹毒丝菌;奴卡氏菌;豚鼠/嗜水气单胞;类鼻疽单胞菌;巴斯德菌属;阴道加特纳菌;军团菌;产气荚膜梭菌;巴斯德菌;霍乱弧菌;新型隐球菌;布鲁氏菌;谢谢!！!