GBT40254-2021 轮枝菌属实时荧光PCR检疫鉴定方法 (2).pdfVIP

ICS65.020.01

CCSB16GB

中华人民共和国国家标准

GB/T40254-2021

轮枝菌属实时荧光PCR检疫鉴定方法

DetectionandidentificationofVerticilliumNeesusingreal-timePCR

2021-05-21发布2021-12-01实施

国家市场监督管理总局串士

国家标准化管理委员会~llJ

GB/T40254-2021

目lj~

本文件按照GB/T1.12020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271)提出并归口。

本文件起草单位z中华人民共和国宁波海关、中国科学院微生物研究所、西宁市蔬菜技术服务中心、

中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国乌鲁木齐海关。

本文件主要起草人：段维军、蔡磊、张慧丽、赵鹏、张晓梅、郭立新、刘芳、李雪莲、张永江、张小菊、

陈先锋。

I

GB/T40254-2021

轮枝菌属实时荧光PCR检疫鉴定方法

1范围

本文件描述了植物病原真菌轮枝菌属实时荧光聚合酶链式反应（PCR）检疫鉴定方法。

本文件适用于携带轮枝菌属病菌的土壤、植物及其产品中轮枝菌属病菌的检测筛查。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文

件，仅该日期对应的版本适用于本文件P不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于

本文件。

SNIT2589植物病原真菌检测规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4基本信息

中文名：轮枝菌属。

学名：VerticilliumNees。

轮校菌属隶属于真菌界（Fungi），子囊菌门（Ascomycota），盘菌亚门（Pezizomycotina），粪壳菌纲

(Sordariomycetes）中的小不整球壳科（Plectosphaerellacea巳）。

传播途径：轮枝菌属病菌主要由种子传播，也可经病残体、土壤、风、灌溉水和昆虫传播。

5鉴定原理

根据轮枝菌属病菌的DNA序列特征及实时荧光PCR原理，应用所设计引物或探针对轮枝菌属病

菌进行检测鉴定。

6仪器设备和器具、试剂和培养基

6.1仪器设备和器具

高压灭菌锅、显微镜、解剖镜、天平、水浴锅、和j冰机、纯水仪、涡旋振荡器、微量紫外分光光度计、高

速冷冻离心机、冰箱、超净工作台、生化培养箱、通风橱、实时荧光PCR仪、微量移液器CO.lµL~2.5µL、

1µL~10µL、10µL~50µL、20µL~200µL、100µL~1oooµU、锥形瓶、培养皿、载玻片、盖玻片。

GB/T40254-2021

6.2试剂

除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。

次氯酸铀、液氮、超纯水、十六烧基三甲基澳化镣（CTAB）提取液（2%CTAB,1.4mol/LNaCl,

20mmol/LEDTA,100mmol/LTris•H