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液相常见注意事项

启动软件：我的电脑——计算机管理——服务——LSSService—

—重启动

软件重装：控制面板——先卸载SkyPDFPro虚拟打印机——再卸

载Labsolution主程序

注：重新安装软件，日志将被压缩。日志每月都压。

开关机顺序：

开机：液相——检测器——CBM控制器——开软件。

关机正好相反。

版本问题：

用高版本可以查看低版本的文件。但是只要用高版本看过，低版

本不能再查看。Labsolution可以打开安捷伦的文件，前提是两个软件

都已安装：右键——AIA格式频道文件——到安捷伦上转换成可以打

开的格式，但会有数据丢失。

查看3D图像：

需如下操作：桌面——属性——设置——高级——疑难解答—

—硬件加速无——应用——确定——软件界面上的视图——3D图像。

分离异构体的色谱：

毛细管电泳——手性异构体

正相色谱——立体异构体

另外：

尺寸排阻色谱（SEC）分为凝胶渗透色谱（GPC）、凝胶过滤色

谱（GFC）。其中GPC都是等度洗脱，溶剂峰出在最后，看到溶剂峰

证明所有的峰已经出完。

梯度洗脱要点：

①溶剂纯度要高，否则重现性差。

②梯度混合的溶剂互溶性要好。

③应使用对流动相变化不敏感的选择性检测器（紫外、荧光），

不能使用对流动相变化明显的通用型检测器（示差折光检测器）。

④最初的实验数据不采用。

试剂级别的影响：

分析纯级和HPLC级的溶剂例如乙腈、正己烷，吸光度差异很大，

如果吸收值异常，可考虑是否用错等级。两级别的甲醇吸光度差异不

大。

溶解样品的溶剂选择

标准品和样品溶剂相同，建议使用流动相溶解，若出现主峰前面

有一个大包样的峰，建议减小进样量，加大浓度（例如进样量20μl，

可进样2μl加大十倍浓度）选择缓冲液的步骤：

①确定最佳分离状态时的流动相pH。

②选择与流动相的pH相近的pKa的缓冲液。

③确定检测波长下缓冲液是否有大的吸收。

（波长210nm附近不能用醋酸和柠檬酸的缓冲液）

分离模式的选择：

第一选择：反相色谱

第二选择：反相离子对色谱/正相色谱

特殊：高分子化合物、无机离子、光学异构体

色谱柱的使用：

①新色谱柱使用前用强溶剂低流速（0.2~0.3ml/min）冲洗

30min，长时间未用的柱子同样处理；先测柱效，保留色谱图和实验

条件；定期检测柱效。

②流动相：高纯度、过滤，pH范围，有机溶剂与色谱柱互溶匹配，

能溶解样品

③分离条件：流速、柱温、梯度的变化幅度。

④定期使用强溶剂冲洗柱子

⑤使用缓冲盐后，先用含10%甲醇水溶液冲洗，再用有机溶剂冲

洗。

⑥正相反相过渡时用异丙醇过渡（最好是小流速过夜0.1ml/min）

柱温箱：

带C的可以降低室温-10℃，不带C的可以降到室温+10℃。

故障排查：

①判断样品池有无污染：

Λ=254nm下，右侧详细——检测器（两能量差越小越好）。

②判断氘灯能量是否充足：

Λ=220nm下，①看参比池能量，②看氘灯运行时间。

若要检测，可用纯水作为样品

维护：

①缓冲液阻塞，应用水（一般加点有机相）冲洗30~60min

（1ml/min），再用甲醇（60%以上）冲洗30min（考虑抑菌、柱子

寿命）。注意：不能用有机溶剂冲洗缓冲盐溶液。

②灯：氘灯寿命2000小时，不要频繁开关（3h）。如果使用达

到2000小时，在保证灵敏度的情况下可以继续使用，但是钨灯不可以。

氘灯能量低于800更换。钨灯，20A540nm下低于500更换。

③管线材料：

1不锈钢（可用于所有连接）

2PEEK（可用于所有