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沙眼衣原体实验诊断技术进展

1907年，捷克学者Halberstaeder和

Prowazek发现沙眼包涵体，1956年我国学

者汤飞凡等分离沙眼衣原体成功，引起了全

世界对其进行广泛深入的研究［1］。沙眼衣

原体(chlamydiatrachomatis,Ct)与人类

疾病关系密切，且目前已成为许多国家和地

区常见的性传播疾病病原体，日益引起人们

重视。Ct感染的诊断决定于病原学检查。随

着检测技术的进展，Ct感染的诊断也不断地

发生变化。我们就此领域的研究进展作一简

述。

一、细胞生物学检测方法

1.涂片镜检：Ct寄生于柱状上皮细胞内

形成包涵体，取宫颈或尿道标本涂片后，通

过碘染色或姬姆萨染色等可见细胞内包涵

体。但由于泌尿生殖道中完整细胞较少，以

及细胞内包涵体脆性较大，从而造成敏感性

过低，不推荐用于临床标本的检查，仅限于

Ct的鉴定［2］。

2.细胞分离培养法：由于Ct的专性细

胞寄生性，一般培养法不能使其生长，只有

在活的细胞内才能增殖、复制。组织细胞培

养法分离Ct多采用McCoy细胞或Hela-229

细胞，染色后在显微镜下观察细胞内有无包

涵体。早期曾试图用尿标本做培养，但阳性

率甚低［3］，只能采用尿道或宫颈拭子。培

养法的特异性为100%，但敏感性一般低于

100%，且各个实验室操作步骤有所不同，没

有标准化，这可能有助于解释对同一种非培

养方法的不同评价。组织细胞培养法是诊断

Ct感染的“金标准”［4］，但是由于分离培

养操作复杂，技术及设备要求高，所需时间

长，且敏感性受标本采集、运送、保存等的

影响较大［5］，加上国内很多医院不具备细

胞培养条件，因而不适于临床应用，多用于

科研和疑难病例的终鉴定。

二、免疫学检测方法

1.直接荧光抗体测定：将针对Ct的单

克隆抗体用荧光标记，与标本中的Ct结合

后，荧光显微镜检查就能见到发荧光的原体。

针对脂多糖的抗体荧光不够亮，且染色不匀；

而针对主要外膜蛋白的抗体荧光更亮，且减

少非特异染色［6］。DFA不象培养法必须存

在有活力的Ct，但其敏感性受人群感染率的

影响，且有判定结果带有主观性，荧光易淬

灭，不适于检测大量标本等缺点。多数学者

报道其特异性较高，Hallsworth等［7］报

道可达100%，因此在科研中常被用作确证试

验。由于此法操作简便、费用低廉，在不具

备分子生物学试验条件的医院，可用以检测

临床标本［8］，但也需经验丰富者操作。

2.酶免疫测定：用酶标记的单克隆或多

克隆抗体检测Ct的LPS或MOMP，酶反应生

成有色产物，用酶标仪进行测定。目前有

Chlamydiazyme、ID-EIA、Pharmacia

ChlamydiaEIA等多种市售诊断试剂盒可供

使用。其敏感性从64%到98%，特异性从93%

到98%［9］。通常认为，其敏感性在高危人

群中可得到满意结果，而在新近感染及治疗

监测中敏感性明显下降。EIA的优点在于方

法简便、操作自动化，适于短时内大批量标

本的检测。但其最大缺点在于，与其他常见

微生物产生交叉反应，如金黄色葡萄球菌、

A群及B群链球菌、淋病奈瑟菌、醋酸钙不

动杆菌、肺炎克雷伯菌及其他革兰阴性细菌，

从而使特异性达不到100%。国外此法多用于

高危人群的筛查，国内应用较少。

三、分子生物学检测方法

1.直接检测核酸的技术：此技术利用核

酸分子的复性原理，用特定的标记探针去检

测标本中的靶核酸。最初为放射性标记，后

来逐渐发展为酶或化学发光试剂标记。目前

有美国圣地亚哥Gen-Probe公司生产的发光

标记基因探针试剂盒PACE-2。与培养法相比，

Gen-Probe方法的敏感性和特异性分别为

73%～96%和98%～99%［9］，尚无培养法敏感

和特异。由于此法成本高、步骤繁琐，随着

核酸扩增技术的出现，基因探针技术也就失

去了其应用价值。

2.核酸扩增技术：继基因探针技术之后，

很快出现了核酸扩增技术，这些技术包括靶