粗糙链孢霉的基因分离和交换--顺序四分子分析.ppt

一、实验目的通过对粗糙链孢霉的赖氨酸缺陷型和野生型杂交所得后代的表型分析，掌握四分子的遗传学分析方法。进行有关基因与着丝粒距离的计算和作图。二、实验原理1.粗糙链孢霉(Neurosporacrassa，2n=14)，又称红色面包霉，在分类学上属于真菌中的子囊菌纲、球壳目、脉孢菌属，目前已知有4～5种。2.其营养体是由单倍体（n=7）的多细胞菌丝体和分生孢子所组成，生活方式由有性和无性两种。菌丝经有丝分裂直接发育成菌丝体，称无性生殖。而两种不同接合型细胞结合产生有性孢子的过程称有性生殖。3.粗糙链孢霉（Neurosporecrasa）有性生殖方式形成的二倍性（2=14）合子可进行减数分裂形成4个子细胞，每个子细胞又经过一次有丝分裂形成2个子细胞，即，共形成8个子细胞，发育成有序地直线排列在子囊中的8个子囊孢子。（注：四分子分析(tetradanalysis)：单一减数分裂的四个产物留在一起称四分子，对四分子进行的遗传分析即为四分子分析）。交换型子囊的出现，是由于某基因与着丝点之间发生了一次染色体片段的交换的结果，即由第一次分裂分离（MⅠ）形成的子囊为非交换型子囊，第二次分裂分离（MⅡ）形成的子囊为交换型子囊，因而第二次分裂分离的子囊数量愈多，表明有关基因和着丝粒的距离愈远。根据第二次分裂分离子囊的频数，就可以计算出某一基因和着丝粒间的距离，这距离称为着丝粒距离。由于交换只发生在二价体的4条染色单体中的2条之间，当每发生一次交换时，交换型子囊中仅有一半子囊孢子属于重组类型，因此某一基因与着丝粒间的重组值（或图距），计算公式如下：重组值＝交换型子囊数／（交换型子囊数＋非交换型子囊数）×1／2×100％。1.第一次分裂分离(MI)基因与着丝粒间无交换，等位基因在第一次减数分裂时分开。子囊孢子中等位基因的分离形式为MI。2.第二次分裂分离（MⅡ)基因与着丝粒间有交换，等位基因在第二次减数分裂时才分开。子囊孢子中等位基因的分离形式MⅡ模式。粗糙链孢霉赖氨酸野生型（Lys+）和赖氨酸缺陷型（Lys-)两种结合型杂交后，得到的子囊果中将出现两种类型的子囊（即：交换性和非交换性子囊），在某一特定时期，由于Lys+的子囊孢子成熟的较早而呈黑色；Lys-的子囊孢子成熟的较晚呈浅灰色。因此，在一个子囊中可以观察到两种颜色的子囊孢子，并根据两种颜色的孢子在子囊中的排列顺序，即可观察统计不同的子囊类型。三、实验材料已固定的粗糙链孢霉野生型菌株(Lys+)与赖氨酸缺陷型菌株(Lys-)杂交得到的子囊果。四、实验用品试剂：蒸馏水仪器及器具：显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、滤纸等。五、实验方法与步骤1.压片观察、统计不同类型的子囊数①用解剖针挑出成熟的子囊果3-5个放在载波片上，加1滴蒸馏水后，盖上另一张载玻片，用两手捏住玻片压片（注意：这里是用载玻片盖上压片而不用盖玻片，因为子囊果很硬，盖玻片易破裂），压片时要适当用力压破子囊果，使子囊呈放射状逸出。②置显微镜下观察，计数不同类型的子囊，并做好记录。2.计算交换率（重组值）：重组值（着丝粒距离）＝交换型子囊数／（交换型子囊数＋非交换型子囊数）×1／2×100％。3.着丝粒作图：重组值除去%，即为图距。注:A为黑色、表面刚有突起的子囊果;B为黑色长刺状突起的子囊果;C为黑色、表面刚有突起的子囊果压片后的子囊孢子;D为黑色长刺状突起的子囊果压片后的子囊孢子。引自张书芹等，安徽农业科学,2011,39(13):7588,7591D.Kostoff用压片法首先在D.melanogaster果蝇幼虫的唾液腺细胞核中发现了特别巨大的染色体——唾液腺染色体（salivaryglandchromosome）。事实上，*粗糙链孢霉（Neurosporecrasa）有性生殖方式形成的二倍性（2=14）合子可减数分裂形成4个子细胞，每个子细胞又经一次有丝分裂形成2个子细胞，这样，共形成8个子细胞，发育成有序地直线排列在子囊中的8个子囊孢子。*。因此，粗糙链孢霉杂交实验可以在显微镜下直接观察基因的分离现象。*