DB34T 2254-2014 水产品中氯霉素残留的检测-胶体金免疫层析法.docxVIP

ICS?67.050

B?50

DB34

安 徽 省 地 方 标 准

DB?34/T?2254—2014

水产品中氯霉素残留的检测—胶体金免疫

层析法

Detection?of?chloramphenicol?residue?in?aquatic?products-?Colloidal?gold

immunochromatographic?method

2014?-?12?-?17?发布 2015?-?01?-?17?实施

安徽省质量技术监督局 发?布

DB34/T?2254—2014

前 言

本标准按照?GB/T?1.1-2009?给出的规则起草。

本标准由合肥市渔政监督管理站提出。

本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：合肥市畜牧水产技术推广中心、合肥市渔业协会、杭州南开日新生物技术有限公

司。

本标准起草人：赖年悦、孙德祥、桑丽雅、周作友、徐薇、陈友顺、杨锐、曹海、张军、夏俊华、

陈元生、程定文、方凯、钱继银、桂淦、胡积清、戴靖、陈晓荣、徐丽、沈亭海、徐经云、季曙春。

I

于?3.0×10?（结合率下降

于?3.0×10?（结合率下降?50％时，相对应的抗体浓度的倒数）。

水产品中氯霉素残留的检测-胶体金免疫层析法

1??范围

本标准规定了水产品中氯霉素（Chloramphenicol，CAP）残留的检测——胶体金免疫层析法的原理、

试剂和材料、仪器和设备、测定步骤、结果判断及表述、结果确证的方法。

本标准适用于鱼、甲鱼、龟肌肉组织和虾、蟹去壳、肠腺的可食用组织中氯霉素残留的快速筛查检

测。

本方法的检出限为?0.3?μg/kg。

2??规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T?6682 分析实验室用水规格和试验方法

3??原理

本法为竞争抑制法，将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记抗体。样品中残留的氯霉

素，经乙酸乙酯提取，正己烷净化，滴加在氯霉素免疫胶体金快速检测试剂板的加样孔中，样品溶液以

硝酸纤维素（NC）膜为载体，利用微孔膜的毛细管作用缓慢向另一端渗移，在移动过程中，样品溶液中

的氯霉素与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，从而抑制了抗体和检测线上特异性结合抗原的结合，

未被氯霉素结合的抗体与检测线上的抗原反应，并通过胶体金的颜色而显示红色条带。用胶体金读卡仪

或目测比较板/卡上控制线（C?线）和检测线（T?线）上红色条带的有无及颜色的相对深浅进行判定。

当试样中的氯霉素含量达到或超过本方法检出限时，检测线较控制线显色淡甚至无显色，判定为阳性；

反之，当试样中的氯霉素含量在本方法检出限以下或无残留时，检测线与控制线显色一致或偏深，判定

为阴性。

4??试剂和材料

4.1 特殊注明外，本法所用试剂均为分析纯，水为符合?GB/T?6682?规定的二级水。

4.2 乙酸乙酯（C4H8O2）。

4.3 正己烷（C6H14）。

4.4 氯霉素免疫胶体金快速检测试剂板

4.4.1 氯霉素结合抗原：偶联率为?1∶10～1∶20（载体蛋白：CAP）。

4.4.2 抗氯霉素抗体：多抗或单抗。多抗效价应大于?5?000（间接?ELISA?法），或有效抗体含量应大

于?0.05?mg/mL；特异性应大于?5?000（间接抑制?ELISA?法）。单抗效价应大于?15?000（间接?ELISA?法），

或有效抗体含量应大于?0.5?mg/mL；特异性应大于?5?000（间接抑制?ELISA?法）。抗体相对亲和力应大

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DB34/T?2254—2014

4.4.3?样品垫：玻璃纤维或纸质薄片。

4.4.4?金释放垫：聚酯纤维片，免疫金释放时间小于?5?min，释放效率大于?80％。

4.4.5?NC?膜：4?cm?毛细管时间?121?s～149?s。

4.4.6?吸水垫：滤纸或玻璃纤维或吸水纸。

4.4.7?背衬：PVC。

4.4.8?塑料模板。

4.4.9?PBST?缓冲液。

4.4.10?储存与使用。密封包装，干燥阴凉处保存，用前恢复至室温，即开即用。

5??仪器和设备

5.1?电子天平：感量?0.01?g。

5.2?均质机：转速≥8000?r/min。

5.3?离心机：离心力≥3?000?g。

5.4?氮气或空气吹干仪：加热温度?≥60℃。

5.5?微量移液器：10?μL～100?μL，100?μL～1?000?μL。

5.6?胶体金读卡仪：测量精度?±0.02?RLU（@??0.4?RLU）、±0.04?RLU（@??0.4?RLU）。

6??测定步骤

6.1 试样制备

鱼去鳞、去皮，取肌肉部分；甲鱼、龟取肌肉部分；虾、蟹去壳、肠腺，取可食部分。切成?0