川贝枇杷膏中霉菌酵母菌的限度检查实验报告.docx

川贝枇杷膏中霉菌酵母菌的限度检查试验报告

一般供试品的检验量10g或10ml，要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加20g或20ml(其中10g或10ml用于阳性比照试验)。

检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品。

一般应随即抽取不少于检验用量(两个以上最小包装单位〕的3倍量供试品。对于口服给药制剂:

细菌数每1g不得超过100Ocfu。每1ml不得超过100cfu。霉菌和酵母菌数每1g或1ml不得超过10Ocfu。

大肠埃希菌每1g或1ml不得检出。

含蜂蜜、王浆的口服给药制剂每10g或10ml还不得检出沙门菌。固体、半固体或黏稠性供试品

取供试品30g，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白豚缓冲液至300ml，用匀浆仪或其

他适宜的方法，混匀，作为1:10的供试液。必要时加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀.

一、抽样:

取三瓶京都念慈庵蜜炼川贝枇杷膏，从每瓶中各抽取30g，混匀，

即

共90g。

培育基的制备数量养分琼脂培育基:

72副皿需1440ml玫瑰红钠琼脂培育基:制备1500ml

20ml/副52副皿需1040ml制备1200ml20ml/副

酵母浸出粉庥葡萄糖琼脂培育基:32副皿

需640ml制备700ml20ml/副

胆盐乳糖培育基:

需800ml制备900ml100ml/瓶

4-甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG):需45ml

EMB或麦康凯琼脂培育基:制备50ml5ml/管

需400ml制备500ml

25ml/副养分肉汤培育基:需1200ml

制备1400ml200ml/瓶

四硫磺酸纳亮绿培育基:

需80ml

制备100ml10ml/管

胆盐硫乳琼脂培育基:

需200ml制备300ml25ml/副

三糖铁琼脂培育基:

需60ml

制备100ml10ml/管

细菌、霉菌、酵母菌计数

三、计数培育基的适用性检查

细菌、霉菌及酵母菌计数用的培育基应进展培育基的适用性检查，成培育基、由脱水培育基或按处方配制的培育基均应检查。

菌种验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代〔从菌种保存中心获得的冷冻枯燥菌种为第o代),并承受适宜的菌种保藏技术进展保存，以保证试验菌株的生物学特性。

大肠埃希菌〔Escherichiacoli)[cMCC(B)44102]

金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)[CMCC(B)26003]枯

草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)[cMCC(B)63501]白

色念珠菌(Candidaalbicans)[CMCC(F)98001]

黑曲霉(Aspergillusniger)[CMCC(F)98003]菌液制

备

接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的颖培育物至养分肉汤培育基或养分琼脂培育基中，培育18~24小时;接种白色念株菌的颖培育物至改进马丁培育基或改进马丁琼脂培育基中,培育24~48小时。上述培育物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。接种黑曲霉的颖培育物至改进马丁琼脂斜面培育基中,培育5~7天，参加3~5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液〔用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管〕至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50~100cfu的孢子悬液。

菌液制备后假设在室温下放置，应在两小时内使用，假设保存在2~8℃，可在二十四小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2~8℃，在验证过的储存期内使用。适用性检查:取大肠埃希菌，金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌各50~100cfu,分别注入无菌平皿中，马上倾注养分琼脂

培育基，每株试验菌平行制备两个培育皿，混匀，凝固，置30~35℃培育48小时，计数;取白色念珠菌，黑曲霉各50~100cfu,分别注入无菌培育皿中，马上倾注玫瑰红钠琼脂培育基，每株试验菌平行制备两个培育皿,，混匀，凝固，置23~28℃培育72小时,计数,取白色念珠菌50~100cfu，注入无菌培育皿中，马上倾注酵母浸出粉陈葡萄糖琼脂培育基，平行制备两个培育皿，，混匀，凝固，置23~28℃培育72小时，计数;同时，用相应的比照培育基替代被检培育基进展上述试验。

结果判定:假设被检出的培育基上的菌落平均数不小于比照培育基上的菌落平均数的70%,且菌落形态大小与比照培育基上的菌落全都，判该培育基的适用性检查符合规定。

四、计数方法的验证

当建立药品的微生物限度检查法时，应进展细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验