犬呼吸道症候群病原分子诊断重组酶介导链替换核酸扩增法.pdf

犬呼吸道症候群病原分子快速诊断重组酶

介导链替换核酸扩增法

1范围

本文件规定犬呼吸道症候群重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA法)分子快速诊断技术规范要求。

本文件适用于犬呼吸道症候群（犬瘟热病毒、犬流感病毒、犬副流感病毒、犬支原体、犬波氏杆菌、

犬腺病毒）兽医临床快速定性诊断。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

犬瘟热病毒：caninedistempervirus,CDV

犬瘟热病毒属于泛嗜性麻疹病毒(Pantropicmorbillivirus)是一种有包膜的负性单链RNA病毒，主要

感染犬类动物。

3.2

犬流感病毒：canineinfluenzavirus,CIV

犬流感病毒属于正黏病毒科和A型流感病毒（InfluenzaAvirus,IAV）属，是一种单股负链RNA

病毒，对家犬及其他全科类动物具有高度传染性，可引起严重的呼吸道症状和致死性肺炎。

3.3

犬副流感病毒：Canineparainfluenzavirus,CPIV

犬副流感病毒在分类上属副粘病毒科中n型副流感病毒亚型，主要引起犬的卡他性鼻炎和支气管炎

等呼吸道症状。

3.4

1

犬支原体：caninemycoplasma,CMYC

犬支原体是一种革兰氏阴性的杆状球菌，主要借由宿主吞噬细胞吞噬作用或借细胞之胞饮作用将基

体摄入细胞内，是犬传染性呼吸道疾病之一，主要引起支原体肺炎、上呼吸道感染和慢性支气管炎等。

3.5

犬波氏杆菌：bordetellabronchiseptica,Bb

犬波氏杆菌，是博德特氏菌属(Bordetella)的一种小型革兰氏阴性杆状细菌，它会引犬传染性支气

管炎，表现为流鼻涕、打喷嚏咳嗽呼吸急促等症状，常与其他细菌病毒混合感染引发各种疾病。

3.6

犬腺状病毒：canineadenovirus,CAV

犬腺状病毒属于乳腺病毒属(Mastadenovirus)和腺病毒科(Adenoviridae)，是导致犬传染性肝炎的最

主要原因之一，主要通过尿液及眼鼻分泌物传播，

3.7

实时荧光RAA：Real-time-RAA

一种重组酶介导链替换的恒温核酸快速扩增技术(简称RAA技术)。利用从细菌或真菌中获得的重组

酶，在恒温下(一般为37℃~42℃),该重组酶可与引物紧密结合，形成酶和引物的聚合体，在单链DNA结

合蛋白SSB的帮助下，打开模板DNA的双链结构，当引物在模板DNA上搜索到与之完全匹配的互补序

列时，在DNA聚合酶的作用下，边转录边形成新的DNA互补链，扩增产物以指数级增长。利用荧光探

针的标记，随着RAA反应的进行，RAA产物与荧光信号的增长呈现对应关系。

3.8

实时逆转录荧光RT-RAA：RT-real-time-RAA

一种重组酶介导链替换的恒温核酸快速扩增技术(简称RT-RAA技术)。利用从细菌或真菌中获得的

重组酶，在恒温下(一般为37℃～42℃),该重组酶可与引物紧密结合，形成酶和引物的聚合体，在单链

DNA结合蛋白SSB的帮助下，打开模板DNA的双链结构，当引物在模板DNA上搜索到与之完全匹配的

互补序列时，在逆转录酶和DNA聚合酶的作用下，边转录边形成新的DNA互补链，扩增产物以指数级

增长。利用荧光探针的标记，随着RAA反应的进行，RAA产物与荧光信号的增长呈现对应关系。

3.9

CT值：cyclethresholod

每个反应管内的荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数。

3.10

T值：cyclethresholod

每个反应管内荧光信号达到设定阈值时所需要的时间。

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