药物色谱分离技术—亲和色谱（制药技术课件）.pptx

色谱分离技术--亲和色谱

亲和色谱—色谱分离技术大纲1.亲和色谱概念2.亲和色谱分离原理3.亲和色谱对载体的要求4.亲和色谱特点5.亲和色谱应用

亲和色谱—色谱分离技术随着生物技术的深入研究，人们认识到生物体中许多大分子化合物，具有与其结构相对应的专一分子可逆结合的特性，如蛋白酶与辅酶、抗原和抗体、激素与其受体、核糖核酸与其互补的脱氧核糖核酸等体系，都具有这种特性，生物分子间的这种专一结合能力称为亲和力。

亲和色谱—色谱分离技术亲和色谱：依据生物高分子物质能与相应专一配基分子可逆结合的原理，采用一定技术，把与目的产物具有特异亲和力的生物分子，固定化后作为固定相，则含有目的产物的混合物（流动相），流经此固定相后，可把目的产物从混合物中分离出来，此种分离技术称为亲和色谱。（一）亲和色谱概念

亲和色谱—色谱分离技术如图所示。（1）把具有特异亲和力的一对分子的任何一方作为配基，在不伤害其生物功能的情况下，与不溶性载体结合，使之固定化，装入色谱柱中；（2）然后把含有目的物质的混合液作为流动相，在有利于固定相配基与目的物质形成络合物的条件下，进入色谱柱。（二）亲和色谱分离原理

亲和色谱—色谱分离技术如图所示。（3）这时，混合液中只有能与配基发生结合反应，形成络合物的目的物质被吸附，不能发生结合反应的杂质分子直接流出。（4）经清洗后，选择适当的洗脱液或改变洗脱条件进行洗脱，使被分离物质与固定相配基解离，即可将目标产物分离纯化。（二）亲和色谱分离原理

亲和色谱—色谱分离技术一般情况下，需根据目标产物，选择合适的亲和配基来修饰固体粒子，以制备所需的亲和吸附介质（固定相）。固体粒子称为配基的载体。作为载体的物质要求：①不溶性的多孔网状结构，渗透性好；②物理和化学稳定性高，有较高的机械强度，使用寿命长；（三）亲和色谱载体的物质要求亲和层析纯化蛋白

亲和色谱—色谱分离技术③具有亲水性，无非特异性吸附；④含有可活化的反应基团，利于亲和配基的固定化；⑤抗微生物和酶的侵蚀；⑥最好为粒径均一的球形粒子。常用的载体有葡聚糖、聚丙烯酰胺等，近年来多孔硅胶和合成高分子化合物载体正在被开发应用于亲和色谱。（三）亲和色谱载体的物质要求

亲和色谱—色谱分离技术亲和配基可选择酶的抑制剂、抗体、蛋白质A、凝集素、辅酶和磷酸腺苷、组氨酸和肝素等。当配基的分子量较小时，将其直接固定在载体上，由于载体的空间位阻，配基与生物大分子不能发生有效的亲和吸附作用，如图中a所示。如果在配基与载体之间连接间隔臂，可以增大配基与载体之间的距离，使其与生物大分子发生有效的亲和结合，如图中b所示。（三）亲和色谱载体的物质要求

亲和色谱—色谱分离技术如果在配基与载体之间连接间隔臂，可以增大配基与载体之间的距离，使其与生物大分子发生有效的亲和结合，如图中b所示。（三）亲和色谱载体的物质要求

亲和色谱—色谱分离技术亲和色谱专一性高，操作条件温和，过程简单，纯化的倍数可达几千倍级，能有效地保持生物活性物质的高级结构的稳定性，其回收率也非常高，对含量极少又不稳定的生物活性药物的分离，极为有效，它是一种专门用于分离纯化生物大分子的色谱分离技术。（四）亲和色谱特点亲和色谱

亲和色谱—色谱分离技术亲和色谱最初用于蛋白质，特别是酶的分离和精制上，后来发展到大规模应用于：酶抑制剂、抗体和干扰素等的分离精制上。在生物化学领域，主要用于各种酶、辅酶、激素和免疫球蛋白等生物分子的分离分析。（五）亲和色谱应用

亲和色谱—色谱分离技术亲和色谱必须要有特异的亲和配体。事实上，不是任何生物大分子间都有特异的亲和力，也很难找到适当的亲和配体；另外，亲和色谱必须针对某一被分离物质而专门制备一种固定相，并寻找特定的色谱条件，因此亲和色谱的应用受到一定的限制。（五）亲和色谱应用