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实验三产中性蛋白酶芽孢细菌的复筛;一、目的意义;关键技术:;蛋白酶的测定（Folin-酚法）原理：
蛋白酶在一定的温度与pH条件下，水解酪蛋白底物，产生含有酚基的氮基酸(如:酪氨酸，色氨酸，苯丙氨酸)，在碱性条件下，将福林试剂(Folin)还原，生成钼蓝与钨蓝，用分光光度计于680nm下测定溶液的吸光度，酶活力与吸光度成正比，由此可计算其酶活力。
定义：
1g固体酶粉(或1ml液体酶)，在一定温度（40℃）和pH值（7.5）条件下，1min水解酪蛋白产生1μg酪氨酸为1个酶活力单位，以U/g(ml)表示。
酶活力计算：
X=（A*K*4/10）*n
注：X-样品的酶活力；
A-样品平行试验的平均吸光度；
K-吸光常数，当OD为1时的酪氨酸的量（μg）；
4-反应试剂的总体积（ml)；
10-反应时间(min)；
n-稀释倍数。;技术路线;第一次实验：;LB液体培养基（10ml/支）
蛋白胨：1g
酵母膏：0.5g
NaCl：1g
琼脂：2g
蒸馏水：100mL
pH7.0
;发酵复筛培养基（100ml/瓶）
葡萄糖5g
蛋白胨10g
酵母膏5g
K2HPO47g
KH2PO43g
MnSO40.4g
干酪素5g
水1000mL
pH7.5115℃，灭菌20min;100μg/ml酪氨酸标准溶液配置：
准确称取预先于105℃干燥至恒重的L-酪氨酸0.1000g，用1mol/L的盐酸60ml溶解后定容至100ml，即为1.00mg/ml的酪氨酸溶液。
吸取1.00mg/ml酪氨酸标准溶液10.00ml，用0.1mol/L盐酸定容至100ml，即得100.0μg/mlL-酪氨酸标准溶液。
0.4mol/L碳酸钠溶液配置：
准确称取无水碳酸钠42.4g，以蒸馏水溶解定溶至1000ml
0.4mol/L的三氯醋酸液配置：
准确称取65.4三氯乙酸，以蒸馏水溶解定溶至1000ml。;L-酪氨酸标准溶液按下表配制：;第二次实验：;第三次实验：;b）操作程序：
试管A(空白)→加酶液1.00ml（40士0.2℃，2min）→加三氯乙酸2.00ml(摇匀)→加酪蛋白溶液1.00ml(摇匀,40士0.2℃，10min)→取出静止l0min，离心→取1.00ml滤液→加碳酸钠溶液5.00ml→加福林试剂使用液l.00ml→40士0.2℃显色20min→于680nm波长，用l0mm比色皿测其吸光度。
试管B(酶试样，需作三个平行试样)→加酶液1.00ml（40士0.2℃，2min）→加酪蛋白溶液1.00ml(摇匀，40士0.2℃，10min)→加三氯乙酸2.00ml(摇匀)→取出静止l0min，离心→取1.00ml滤液→加碳酸钠溶液5.00ml→加福林试剂使用液l.00ml→40士0.2℃显色20min→于680nm波长，用l0mm比色皿测其吸光度。;c）酶活力计算
X=（A*K*4/10）*n
式中:
X一样品的酶活力，u/g(ml)；
A一样品平行试验的平均吸光度；
K一吸光常数；
4一反应试剂的总体积,ml；
10一反应时间10min，以lmin计；
n一稀释倍数。
所得结果表示至整数，平行试验相对误差不得超过3%。;三、数据结果;四、讨论分析;五、参考文献（举例）
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