菌根化红松苗木培育技术规程（征求意见稿）.docx

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地方标准DBXX/XXXXX—XXXX

菌根化红松苗木培育技术规程

TechnicalregulationsforcultivationofmycorrhizalKoreanpineseedlings

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（征求意见稿）

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX

发布

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I

前言

本标准根据GB/T1.1-2020给出的规则起草。本标准由吉林省林业和草原局提出并归口。

本标准起草单位：吉林省林业科学研究院

本标准主要起草人：潘艳艳、张义飞、钟鑫、衣晓雨、张大伟、付世萃、刘存发、何怀江、包广道、刘婷、罗也、潘丽铭、李鸿、李建平

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菌根化红松苗木培育技术规程

1范围

本文件确立了菌根化红松苗木培育的程序，规定了菌剂制备、共生体系建立与培养、苗期管理及苗木出圃等的操作指示，描述了过程记录的追溯方法。

本文件适用于菌根化红松苗木培育。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6001育苗技术规程

GB7908-1999林木种子质量分级GB20287-2006农用微生物菌剂

LY/T2289林木种苗生产经营档案DB22/T-2020红松播种育苗技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

菌根菌剂mycorrhizalinoculant

以菌根真菌为生产菌种制成的微生物菌剂。3.2

菌根化育苗mycorrhizalseedlings

把菌根菌剂接种到红松幼苗根系上，形成菌根共生体。3.3

菌根统计计算法

取长度相同或等量的根，统计其菌根数量，统计单位长度根系中菌根的数量，或计算菌根化的根段长度占根段总长度百分比。

4菌根化红松培育流程图

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图1菌根化红松苗木培育技术流程图

5菌剂制备

5.1菌种选择

选择粘柄丝膜菌和厚环乳牛肝菌2个菌种。菌剂符合GB20287-2006要求。

5.2培养基准备

5.2.1复壮培养基

采用MMNA培养基（20%马铃薯汁500mL、葡萄糖20g、麦芽汁500mL、VB10.05g、琼脂20g），做成平板培养基。

5.2.2斜面培养基

采用PDA培养基（马铃薯200g、葡萄糖20g、MgSO41.5g、KH2PO43.0g、蛋白胨3g、琼脂20g、牛肉膏0.3g、水1L），做成PDA综合培养基。

5.2.3扩繁培养基

采用PD培养基（马铃薯200g、葡萄糖20g、MgSO41.5g、KH2PO43.0g、蛋白胨3g、牛肉膏0.3g、水1L），灭菌后装入发酵罐中。

5.3菌种复壮

在超净工作台内，将保存的粘柄丝膜菌和厚环乳牛肝菌菌株在室温条件下放置1d后，用接种针挑出边缘菌丝块，接种到MMNA平板培养基上，置于25℃暗培养室内培养5d~7d，挑出无杂菌、菌丝健壮、整齐的菌落作为母种进行扩繁。

5.4菌种培养

5.4.1一级菌种培养

在超净工作台内，用打孔器在复壮菌种上切取5mm×5mm大小的健壮菌落前端菌丝块，接种到

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PDA斜面培养基上，于25℃暗培养室内培养28d~30d，菌丝长满斜面后作为一级菌种。

5.4.2二级菌种培养

在超净工作台内，用打孔器在一级菌种上切取5mm×5mm大小的菌饼，接种到装有200mLPD培养基的500mL三角瓶内，每瓶接入3片，置入恒温摇床（25℃,转速为100r/min）培养，形成大量菌丝球即可作为二级菌种。

5.4.3菌剂生产

按配方（草炭：蛭石：玉米面：麦麸=1:1:1:1）将基质配好拌匀，用装袋机装入塑料袋，每袋1Kg，封口，灭菌121℃下3h，冷却至25℃,在超净工作台下接入菌种，每袋接种二级菌种100ml，置30℃下培养20d，经检验合格保存备用。

6共生体系建立与培养

6.1种子培育菌根化苗

6.1.1种子处理

将种子与饱和含水量30%