药学药物化学生物学.pptx

药物化学生物学——文献阅读孙忠涛药学121所属杂志：NatureChemicalBiologySCI分区：作者：吴乔教授与林天伟教授日期：发表于30March,2015影响因子：13.217大类学科小类学科BIOLOGY（1区）BIOCHEMISTRYMOLECULARBIOLOGY(1区)ImpedingtheinteractionbetweenNur77andp38reduceLPS-inducedinflammation

败血症（sepsis）败血症是指致病菌或条件致病菌侵入血循环，并在血中生长繁殖，产生毒素而发生的急性全身性感染。败血症伴有多发性脓肿而病程较长者称为脓毒血症。

脂多糖（LPS）MAPKsNF-KBp65p50取自于革兰氏阴性细菌外膜的脂多糖（又称内毒素）可以引起内毒性休克，它能快速激活丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs），IKB激酶（IKKs）和许多下游转录因子，继而控制促炎细胞因子的表达。在这些转录因子中，最为重要的是NF-KB，它由两个亚基构成——p65和p50，这两个亚基由于抑制因子IKB的抑制作用可以稳定存在于细胞质中，但是IKB由于激酶（IKK）的作用磷酸化，然后通过泛素-蛋白酶体通路降解之后，将会导致有转录活性的NF-KB转运进细胞核内进行一系列的生化反应。IKB（-）（-）一系列生化反应phosphorylatedegrade

p38kinasep38是NF-KB上游的一个重要的因子，他可以正性调控急性期炎症反应中的一系列基因的表达，故我们可以通过特殊的抑制剂来阻断p38以减弱NF-KB的表达但是NF-KB的DNA结合活性与p38的活性无关，也就暗示了p38对NF-KB的影响可能是间接影响。有报道称，p38通过IL与IFN的刺激，可以使乙酰基转移酶的辅助基团p300磷酸化，导致乙酰基转移酶活性增强，进而增加p65的乙酰化程度，最终加强初级星形胶质细胞中NF-KB的活性。P38受IL和IFN刺激乙酰基转移酶NF-KB活性

孤儿受体Nur77孤儿受体Nur77与固醇类激素受体结构相似，是核受体超家族的重要成员之一提升Nur77的表达量可以降低巨噬细胞中由于LPS和TNF的刺激产生的致炎细胞因子和化学因子的含量，并且可以通过下调内皮细胞中IKB的表达使得单核细胞的黏附性下降。Nur77致炎细胞因子致炎化学因子单核细胞黏着性(+)

通过上述可知已知p38和NF-κB信号通路能够促进炎症的发生发展过程。Nur77通过与p65蛋白结合，抑制了p65结合DNA的能力，进而抑制NF-κB信号通路及其下游细胞因子的释放，但是在炎症信号（如LPS）的刺激下，激活的p38α能够磷酸化Nur77第27及143位苏氨酸，导致Nur77功能丧失，由此阻断了Nur77对NF-κB转录活性的抑制和下游细胞因子的释放。因此，有效地阻断p38α的磷酸化能够保证Nur77发挥抑制炎症的独特功能。

基于上述新发现，研究人员从实验室自己构建的化合物库筛选出一个特异靶向Nur77的小分子化合物PDNPA，它通过结合Nur77，能够竞争性地阻断p38α对Nur77的磷酸化，使得Nur77高效地发挥抑炎功能，从而治疗脓毒症，显著地提高小鼠生存率。PDNPA

9关于如何发现新的靶标课题组通过研究小鼠脓毒症模型发现，与野生型（WT）小鼠比较，Nur77基因敲除（KO）小鼠对于脂多糖及盲肠结扎穿刺（CLP）诱导的脓毒症更为敏感，感染小鼠在3天后全部死亡，小鼠体内细胞因子的表达水平明显高于野生型小鼠，说明Nur77在脓毒症反应中发挥抑制因子的作用注：CLP是专门为研究人类败血症而创建的一种小鼠模型

只有SB202190（一种p38的抑制剂）阻碍了在Nur77苏氨酸残基上的LPS介导的乙酰化，这也就向我们暗示，在LPS介导对Nur77的乙酰化过程中，起决定性作用的是p38。

11P38的磷酸化发生在哪个位点呢？删除掉N端第153个氨基酸残基之后，p38对Nur77的磷酸化现象完全消失，这也表明了被磷酸化的残基是位于转录激活区（TAD）的单位点突变磷酸化作用存在双位点突变磷酸化作用消失27位Thr+143位Thr27位Thr143位Thr27位苏氨酸或143位苏氨酸进行单位点突变时，p38的磷酸化作用依然存在，但是当27位和143位同时突变之后，该作用就无法检测得到Nur77的第27位苏氨酸和143位苏氨酸这两个位点都是p38的底物结合位点

我们对PDNPA对NF-KB的IC50（半数抑制浓度）以及Nur77的Kd值进行测定实验证明两者并不相同这也说明了PDNPA并不是直接与NF-KB结合来抑制其活性的在这