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超氧化物歧化酶活力测定
-21准备实验材料目录Contens2配制试剂3操作步骤4注意事项
超氧化物歧化酶活力测定超氧水杨酸(SuperoxideDismutase，简称SOD)是一种广泛存在于各种生物体内的抗氧化酶，其主要作用是清除细胞内的超氧自由基，保护细胞免受氧化应激的损害。SOD的活力测定在生物医学、食品科学、环境科学等领域具有重要意义以下是一种超氧水杨酸活力测定的方法，具体步骤如下
超氧化物歧化酶活力测定准备实验材料超氧水杨酸标准品磷酸缓冲液(PBS)邻苯三酚(OPP)甲硫氨酸(Met)乙二醛四乙：酸二钠(EDTA-2Na)
超氧化物歧化酶活力测定01考马斯亮蓝G-25002实验管03紫外可见分光光度计04离心机05移液枪
超氧化物歧化酶活力测定配制试剂OPP溶液：将邻苯三酚溶解于磷酸缓冲液中，配制成10mmol/L的溶液Met溶液：将甲硫氨酸溶解于磷酸缓冲液中，配制成10mmol/L的溶液SOD酶液：将待测样品加入磷酸缓冲液中，用移液枪将样品反复吹吸混匀
超氧化物歧化酶活力测定SOD底物溶液：将邻苯三酚和甲硫氨酸按1:1的比例混合，配制成10mmol/L的溶液EDTA-2Na溶液：将乙二醛四乙酸二钠溶解于磷酸缓冲液中，配制成1mmol/L的溶液考马斯亮蓝G-250溶液：将考马斯亮蓝G-250溶解于甲醇中，配制成0.1%的溶液
超氧化物歧化酶活力测定操作步骤对照管：取1mLOPP溶液、1mLMet溶液、1mLSOD底物溶液、1mLEDTA-2Na溶液和1mL磷酸缓冲液，加入实验管中，用移液枪将管内液体轻轻吹吸混匀。在30℃恒温下反应30分钟，然后加入1mL考马斯亮蓝G-250溶液，混匀后静置10分钟。在560nm波长下测定吸光度(A对照)
超氧化物歧化酶活力测定实验管：取1mLSOD酶液、1mLOPP溶液、1mLMet溶液、1mLEDTA-2Na溶液和1mL磷酸缓冲液，加入实验管中，用移液枪将管内液体轻轻吹吸混匀。在30℃恒温下反应30分钟，然后加入1mL考马斯亮蓝G-250溶液，混匀后静置10分钟。在560nm波长下测定吸光度(A实验)计算：根据以下公式计算SOD活力。SOD活力(U/mL)=[(A对照-A实验)/A对照]×反应时间(分钟)×V酶液/V样品其中，A对照为对照管的吸光度，A实验为实验管的吸光度，反应时间为30分钟，V酶液为酶液体积(mL)，V样品为样品体积(mL)
超氧化物歧化酶活力测定注意事项在操作过程中要保持恒温环境：以避免温度波动对实验结果的影响在加入考马斯亮蓝G-250溶液后要静置一段时间：以保证染料的充分结合在测定吸光度时要选择合适的波长：以保证测量的准确性
-THANKS谢谢Thanksforwatching
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