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苯妥英钠分布实验
实验目的
通过检测苯妥英钠的血药浓度，及脑、肝、肌肉等组织样品中苯妥英钠的含量，掌握该药的体内分布特点。
实验材料
动物：雄性Wister大鼠（250-300g）。
药品：10%水合氯醛、1%肝素、苯妥英钠片、苯妥英钠标准品、卡马西平标准溶液（5μg/ml）、甲醇（色谱纯）、乙酸乙酯、生理盐水
器材：大鼠灌胃器、一次性注射器、手术器材、E天枰、滤纸、玻璃研磨器、离心机、水浴锅、微量进样器、HPLC色谱仪、负压过滤装置。
实验步骤与方法
组织采集
1、取大鼠一只，称重。
2、将苯妥英钠片（200mg/kg）研磨后加水溶解至3ml左右，给大鼠灌胃。
3、2小时后，大鼠腹腔注射过量的水合氯醛处死。
4、剪开大鼠胸腹腔，自心脏采血2ml于EP管中（事先加入1%肝素100μl），依次取出脑、肝、肌肉、肾、心、肺、脾等组织，用生理盐水洗去血液。
5、将血样离心3000rpm，5min，取血浆冻存。
6、各组织用滤纸吸干水分，分别称取0.5g，冻存。
样品处理
1、血样处理同前。
2、取出冻存组织，剪碎，放入玻璃研磨器中并加
2ml生理盐水进行研磨。
3、将匀浆后组织放入离心管中，加4ml乙酸乙酯
，振荡2min。
4、离心，3000rpm，5min。
5、吸取乙酸乙酯层3ml于另一干净玻璃离心管
中，55°C水浴风干，4°C保存备用。
HPLC检测
1、配制流动相：甲醇（色谱纯）：水（重蒸馏水）为60：40，配好的流动相用微孔滤膜过滤，超声15min除去气泡。
2、平衡机器：开机、除气，待基线平稳后进样。
3、样品溶解：取风干后样品，加50μl甲醇溶解，旋涡振荡溶解样品。
4、检测：进样10μl，紫外波长220nm，流速1ml/min。
数据处理
记录，根据标准曲线估算各样品中苯妥英钠浓度。
以组织为横坐标，苯妥英钠浓度为纵坐标，绘制苯妥英钠组织分布曲线。
分析实验结果，形成实验报告。
标准曲线制备
1、标准溶液的配制：精密称取苯妥英钠标准品，用甲醇溶解后定容成800μg/ml，4°C保存。
2、取7支玻璃离心管，分别加入不同体积苯妥英钠标准溶液，制成不同浓度的血浆样品0.25ml，并于各管中加入50μl卡马西平作为内标，漩涡震荡混匀，再加乙酸乙酯1ml萃取。
3、处理及检测同前。
4、记录
5、以浓度为横坐标，苯/卡比值为纵坐标，做回归分析，得回归方程。
思考题：
1、生物样品预处理的目的。
2、影响药物在体内分布的因素。
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