外泌体与肿瘤.pptx

外泌体与肿瘤思路迪医学部赵萌

外泌体外泌体是一种直径30~100nm的膜性小囊泡，广泛分布于唾液、血液、脑脊液、尿液，乳汁等几乎所有体液及体外细胞培养的培基中。?外泌体起源于细胞內吞途径中的多泡体(MVB)，通过出芽方式从细胞释放，含有蛋白质、脂质、核酸等多种活性成分。?外泌体是细胞之间信号传递的载体，来自肿瘤细胞的外泌体（tumor-derivedexosomes,TEX）被认为在肿瘤的生长、增殖、迁移、侵染等过程中发挥多种功能。AnnuRevPhysiol.2015;77:13-27.

当细胞经内吞形成早期核内体后（Ees），其内可含有外源性抗原：Ees的囊膜内陷、裂解，形成多个小囊泡，并选择性接收细胞质内的蛋白成分和脂类，形成晚期核内体MVB。细胞内的MVB主要有3种去向：(1)继续接受细胞质中的大分子和囊泡结构，形成内涵体，然后与溶酶体融合，使其内容物降解；(2)直接与溶酶体结合而降解其内容物；(3)以钙离子依赖的方式与细胞膜融合，将其内部所包含的多个囊泡结构释放至细胞外基质中，即形成外泌体外泌体形成JCellBiol，1985，101(3):942-948

外泌体的结构外泌体中含有丰富的蛋白，脂质，DNA和RNA(mRNA,miRNA,lncRNA,ncRNA等）JClinInvest.2016Apr1;126(4):1216-23.蛋白质占据了外泌体内含物的很大部分，种类非常丰富,大致可分为两类：一类是外泌体中普遍存在,参与其结构形成的蛋白质，多分布于外泌体的表面。另一大类蛋白质与细胞来源有关,相对特异。截至目前，在Exocarta数据库中收录了近286项研究结果，归纳发现，外泌体携带的蛋白质达9769种，mRNA3408种，miRNA2838种。经由外泌体向细胞外转运，还含有1116种脂质体参与机体多种重要的生理或病理过程。

外泌体分离AnnuRevPhysiol.2015;77:13-27.离心法：这是目前外泌体提取最常用的方法，此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块，由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种方法得到的是微泡不是外泌体、过滤离心：外泌体是一个囊状小体，相对分子质量大于一般蛋白质，因此选择不同大小的MWCO膜可使外泌体与其他大分子物质分离。这种操作简单、省时，不影响外泌体的生物活性，但同样存在纯度不足的问题。密度梯度离心:用此种方法分离到的这种方法可以保证外泌体形态的完整，特异性高、操作简单、免疫磁珠法:不需要昂贵的仪器设备,但是非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性，不便进行下一步的实验，外泌体纯度高，但是前期准备工作繁杂，耗时，量少色谱法:分离到的外泌体在电镜下大小均一，但是需要特殊的设备，应用不广泛

外泌体的鉴定外泌体鉴定方法：1)Westernblotanalysis-通过CD9、CD63等外泌体标志物鉴定其特异性；2)透射电子显微镜(TEM)，鉴定外泌体囊泡大小和形态；3)动态光散射技术(DLS)/纳米微粒追踪分析(NTA)，鉴定外泌体囊泡大小JClinInvest.2016Apr1;126(4):1152-62.

外泌体与肿瘤诊断及监测23451外泌体与肿瘤发生发展外泌体与肿瘤血管新生外泌体与肿瘤治疗与耐药外泌体与肿瘤转移6外泌体与肿瘤免疫

PKT小鼠模仿人类胰腺癌发展过程，4.5周时形成PanIN，8周时死于PDACGPC1+外泌体的比例随着肿瘤体积增大和组织学分化异型性增大而不断升高外泌体的浓度与大小同样与病情进展无相关性Nature.2015Jul9;523(7559):177-82外泌体早期诊断AnnTranslMed.2016Feb;4(4):64

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