分子诊断的其它应用专家讲座.pptx

全国高等医药院校教材-分子诊疗学;全国高等医药院校教材-分子诊疗学;第一节分子诊疗在移植配型中

应用—HLA分子生物学分型;一、HLA与器官移植;②主要组织相容性抗原（MHA）

主要组织相容性抗原

Majorhistocompatibilityantigen

次要组织相容性抗原

人类白细胞抗原HLA

Humanleukocyteantigen

其中与移植排斥相关主要为HLA-Ⅰ类和Ⅱ类抗原。;③主要组织相容性复合体（MHC）

编码MHA(在人为HLA)基因是一组呈高度多态性基因群，集中分布于染色体上特定区域，称为主要组织相容性复合体（majorhistocompatibilitycomplex，MHC），MHC编码产物称为MHC分子。;抗原

?

免疫系统抗原肽－MHCⅡ/Ⅰ分子复合物

??

免疫应答CD4+/CD8+T细胞

（细胞免疫、体液免疫）

?

抗原性异物排除

◆MHC分子为T细胞分化发育所必需

◆MHC分子为免疫应答开启和调整所必需;;(一)MHC/HLA基因组成

人类MHC又称为HLA基因复合体，位于第6对染色体短臂6p21.3上，约4000kb。

HLA基因有七大类：即A，B，C，D，DR，DQ，DP。这七大类座位内又有不一样位点。

依据编码分子功效和分布不一样，可将整个复合体基因分成三类：Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类基因。;;;;HLA基因分类;HLA抗原分布;MHCclassIproteinsformafunctionalreceptoronmostnucleatedcellsofthebody.;Thereare3majorand2minorMHCclassIIproteinsencodedbytheHLA.ThegenesoftheclassIIcombinetoformheterodimeric(αβ)proteinreceptorsthataretypicallyexpressedonthesurfaceofantigenpresentingcells.;;（二）HLA遗传特点;;;2．共显性遗传

共显性（co-dominance）是指某位点等位基因均能同等表示，二者编码产物都可在细胞表面检测到。

多数个体HLA位点都是杂合子，但当父亲和母亲在某位点上含有相同等位基因时，其子代这个位点就成为纯合子。;CodominantexpressionofHLAgenes;;3．连锁不平衡

理论上，一个HLA位点等位基因与另一个或几个位点等位基因在某一单倍型出现频率应等于各自频率乘积。然而实际情况是，在不一样地域或不一样人群，一些基因相伴出现频率尤其高，这种现象称为连??不平衡。

已经发觉一些疾病发生与HLA复合体中一些特定等位基因亲密相关。;二、分子生物学分型法;2.PCR-SSP分型法[等位基因特异性PCR（ASPCR）]

设计出一整套等位基因组特异性引物（sequencespecificprimer,SSP），借助PCR技术取得HLA型特异扩增产物，可经过电泳直接分析带型决定HLA型别，从而大大简化了试验步骤。优点是简单易行,分辨率可从低到高,成本低。缺点是不易自动化;不能检测新等位基因，试剂盒需不停升级。;3.PCR-SSCP分型法

假如二个HLA等位基因存在点突变，经PCR扩增后进行聚丙烯酰凝胶电泳，因其序列差异形成不一样空间构象，则电泳迁移率也不一样，如此可将它们区分开。

PCR-SSCP作为PCR-SSO补充，有利于新HLA等位基因或突变体发觉，在区分纯合子和杂合子基因方面有其独到之处。;4.SBT分型法

SBT分型法——基于序列HLA分型法(Sequence-BasedHLATyping)，是通过对扩增后HLA基因片段进行核酸序列测定，从而判断HLA型别方法。

以上各个方法都存在一些缺点，如能配合使用，则能大大提升分型能力。;5.基因芯片技术;;移植配型(又称为HLA配型/组织配型):指在器官移植中检验供受者之间移植抗原（HLA）是否相配一系列办法。当前主要检测是ABO抗原系统和HLA抗原系统。

HLA抗原系