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2023医学微生物学实验三课件

目录contents实验三：流感病毒的分离与鉴定实验四：细菌的生化鉴定实验五：抗药性菌种筛选及药敏试验实验六：病毒的细胞培养实验七：血清学试验及凝集反应医学微生物学实验总结及展望

01实验三：流感病毒的分离与鉴定

实验目的掌握流感病毒的分离与鉴定方法了解流感病毒感染人体细胞的过程熟悉病毒培养和鉴定的基本流程掌握病毒的致病特点和预防措施

01流感病毒属于正粘病毒科，是单股负链RNA病毒。根据核蛋白抗原性的不同，分为A、B、C三型，其中A型最具抗原性，变异性强，易引起大规模流行。实验原理02流感病毒感染人体后，首先在呼吸道上皮细胞中增殖，引起细胞损伤和炎症反应，导致临床上出现发热、咳嗽、喉痛、肌肉酸痛等症状。03常用的流感病毒分离方法有鸡胚分离法和细胞培养分离法。本实验采用MDCK细胞培养分离法，将感染流感病毒的病料接种在MDCK细胞上，通过病毒的吸附、穿入、脱衣、增殖等过程，最终获得病毒液。

准备实验器材和试剂：细胞培养瓶、细胞培养液、胎牛血清、青霉素-链霉素双抗溶液、流感病毒病料等。将MDCK细胞培养液接种在细胞培养瓶中，于37℃、5%CO2培养箱中培养至80%汇合。用无血清培养液洗脱培养细胞，加入病毒病料，于37℃、5%CO2培养箱中培养24小时。收集上清液，离心沉淀细胞，取上清液继续接种培养细胞，如此传代培养，逐渐收集病毒液。用血凝试验检测病毒液的凝集活性，用标准血清做对比试验。实验步骤

02实验四：细菌的生化鉴定

掌握细菌的生化鉴定原理和方法。熟悉不同细菌的生化反应特征。学习细菌的分类和鉴别方法。实验目的

细菌的生化鉴定是通过测定细菌对各种碳源、能源、无机元素的利用和代谢产物，以确定其营养和代谢特性的一种方法。细菌的生化反应试验包括糖发酵试验、靛基质试验、柠檬酸盐利用试验、尿素酶试验等，这些试验可反映细菌的生物学特性，有助于鉴别不同种类的细菌。实验原理

实验步骤准备实验材料：细菌培养物、生化反应试剂、培养基等。将细菌菌落或菌液涂布或滴加于生化反应平板或液体培养基中，于适当的温度下培养一定时间。将细菌培养物接种于适当的培养基上，培养一定时间至细菌生长良好。观察记录生化反应结果，根据不同细菌的生化反应特征进行鉴别和分类。

03实验五：抗药性菌种筛选及药敏试验

实验目的了解常用抗菌药物的作用特点及抗菌谱；学会抗药性菌种的筛选及药敏试验的方法和结果分析。掌握微生物对抗菌药物的耐药机制；

抗药性菌种筛选通过在含有不同抗菌药物的平板上筛选出具有耐药性的菌落，并对不同抗菌药物进行对比分析，以确定菌种的耐药性；药敏试验根据菌种的耐药性，采用纸片扩散法、稀释法等方法测定菌株对不同抗菌药物的敏感性，以确定抗菌药物对菌株的治疗效果。实验原理

实验步骤抗菌药物平板、接种环、酒精灯、无菌操作台等；准备实验材料将待测菌株划线接种于抗菌药物平板上，于37℃恒温培养24-48小时；操作步骤观察菌落的生长情况及抑菌圈大小，对比不同抗菌药物的抑菌效果；结果观察根据抑菌圈大小，得出待测菌株对不同抗菌药物的敏感性，并进行对比分析。结果分析

04实验六：病毒的细胞培养

1实验目的23掌握病毒的细胞培养技术的基本原理和操作流程；了解不同病毒对细胞培养的影响和感染过程；学习如何检测病毒感染细胞的特异性抗体和病毒的抗原。

病毒与细胞培养病毒是一种高度凝集的微生物，由核酸和蛋白质组成。病毒感染细胞后，通过吸附、穿入、脱壳等过程进入细胞内，利用细胞的代谢机制进行繁殖，最终导致细胞死亡；实验原理细胞培养细胞培养是一种体外培养细胞的技术，通过模拟体内环境，使细胞在体外继续生长和分裂。常用的细胞培养技术包括组织块培养、细胞悬液培养、细胞系培养等；病毒感染细胞的检测病毒感染细胞后，可以引起细胞形态和功能的改变，通过检测这些改变可以反映病毒感染的情况。同时，通过免疫学方法也可以检测病毒感染细胞的特异性抗体和病毒的抗原。

实验步骤记录实验结果并进行分析。通过免疫学方法检测病毒感染细胞的特异性抗体和病毒的抗原；在不同的时间点观察细胞的生长情况和形态变化；准备细胞培养液、病毒液、抗体等实验材料；将细胞培养液加入细胞培养瓶中，加入已经感染病毒的细胞；

05实验七：血清学试验及凝集反应

掌握血清学试验及凝集反应的基本原理和实验操作流程；了解和掌握抗体、抗原的性质以及其在血清学试验和凝集反应中的作用；熟悉血清学检测和凝集反应在医学和生物学领域的应用。实验目的

血清学试验是以免疫球蛋白抗体作为抗原或抗体的检测方法，常用的有间接凝集反应、双特异性凝集反应和胶体金等方法。双特异性凝集反应是利用两种不同的抗体特异性结合，加入待测样本后，若样本中含有这两种抗体的相应抗原，即可形成沉淀，常用的有协同凝集反应等方法。胶体金法是一种常用的免疫标记技术，通过胶体金作为标记物，