结核感染t细胞检测课件.ppt

结核杆菌特异性T细胞应答体外检测实验焦作市第三人民医院感染五科孙建民

20亿人口曾受到结核分枝杆菌感染2021年新发和复发病例850-920万，死亡病例120-150万全球MDR-TB病例约44万中国和印度占全球病例的40%，中国第二

年发病例：100万活动性肺结核：500万涂阳肺结核：72万死亡年人数：5.4万年新发MDR-TB人数：10万涂阳肺结核占活动性肺结核14.4%，有85.6%〔428万〕活动性肺结核不能通过痰检得到明确诊断结核菌素实验：只有少局部活动性肺结核患者呈强阳性。由此推断至少有85.6/2(42.8%，219万)不能通过结核菌素实验或痰检明确诊断。结核菌培养耗时长，阳性率低，对初诊患者意义不大。核酸检测基层医院少有开展〔焦作未开展〕至少42.8%〔以此推算我市约6064例〕的活动性肺结核患者怎么明确诊断？

结核感染T细胞检测结核感染r干扰素释放实验两种方法：酶联免疫吸附实验酶联免疫斑点实验

1.3结核诊断传统结核诊断方法细菌培养

TB感染者血液中特异性T细胞再次接触到TB抗原，迅速产生IFN-γIFN-γ与TB有很好的量对应关系，呈正相关TB-IGRA通过检测体外释放的IFN-γ的含量确定是否感染TB未感染TB不产生IFN-γ结核感染T细胞检测原理

结核感染T细胞检测原理通过比较基因组学发现卡介苗和结核分枝杆菌间存在RD区RD1区一般只存在于结核分枝杆菌，可能形成ESX-1分泌机制。该分泌系统中有两个重要蛋白，早期分泌抗原-6(ESAT-6)和培养基滤过蛋白-10(CFP-10)具有较强的Thl表位。ESAT-6和CFP-10作为体外刺激抗原来检测结核分枝杆菌越来越频繁，这种方法被定义为体外T细胞IFN-γ释放试验〔IGRA〕。

NTP结核特异抗原ESAT-6、CFP-100刺激感染过结核的T淋巴细胞产生γ-干扰素PHA[植物血凝素]:刺激T淋巴细胞产生γ-干扰素一个人感染了结核产生γ-干扰素一个人未感染结核不会产生γ-干扰素结核感染T细胞检测流程检测管

NTP22±2hNTP离心血浆6点定标夹心法γ-IFN2h2个工作日培养

检测管：TB蛋白阳性管：PHA阴性管：无采血，分别加入阴、阳性对照管和检测管1ml37度封闭培养22小时收集上清ELISA定量检测上清中IFN-γ含量检测管阴性对照管阳性对照管培养液刺激抗原培养液无刺激原培养液PHA试剂盒的检测流程

TST与IGRA

2.3IGRA应用实例

●IGRA对涂阴肺结核具有较好的辅助诊断作用

与TST或痰涂片比较的优势敏感性和特异性均可达约90%不受BCG接种的影响不受非结核分枝杆菌感染的干扰不受免疫功能状态的影响

临床意义阳性表示TB感染包括潜伏感染，活动性结核阴性表示无TB感染

开展情况欧、美、日、韩等低流行国家和地区已作为常规诊断和筛查指标。国内早就认识到原有方法学的缺陷，列入国家“十一五〞重大传染病专项重点研发试剂之一。国内很多大医院相继开展，我省少数医院开展。我院2021年开展，已较好地效劳于临床。

工程收费：2021年新增试行医疗效劳工程和价格表250403914，结核感染T细胞检测，收费760元/次

焦卫〔2021〕185号文件

医联体

焦作市第三人民医院感染五科孙建民让我们共同努力为焦作市结核病防治工作尽到自己的一份力量

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