研究生第七讲.pptx

;发酵培养-五

;一、概述

物理参数：温度、搅拌转速、空气压力、空气流量、表观粘度、浊度、罐压、泡沫等。

化学参数：基质浓度（包括糖、氮、磷等）、pH、产物浓度、溶氧浓度、CO2浓度、核酸量等。

生物参数：菌丝形态、菌浓度、菌体比生长速率、呼吸强度、关键酶活力等。

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三大参数从检测手段分可分为：直接参数、间接参数

1、直接（状态）参数：

通过仪器或其它分析手段可以测得的参数，如温度、pH、残糖等。

直接参数——在线检测参数和离线检测参数

;1.1在线检测参数

指不经取样直接从发酵罐上安装的仪表上得到的参数，如温度、pH、搅拌转速、溶氧等。

在线检测必须用专门的传感器（也叫电极或探头）放入发酵系统，将发酵的一些信息传递出来，为发酵控制提供依据。

由于微生物培养过程是纯培养过程，无菌要求高，因此对传感器有特殊要求：

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插入罐内的传感器必须能经受高压蒸汽灭菌（材料、数据）

传感器结构不能存在灭菌不透的死角，以防染菌（密封性好）

传感器对测量参数要敏感，且能转换成电信号。（响应快、灵敏）

传感器性能要稳定，受气泡影响小。

;在线检测原理：

化学或物理信号电信号

放大记录显示仪（半自动）

控制器（与设定参数比较）

发出调节信号控制器动作（全自动）;1.2离线检测参数

指取出样后测定得到的参数，如残糖、NH2-N、菌体浓度。

2、间接参数：

将直接参数经过计算得到的参数，如摄氧率、KLa等。;

按性质：物理参数，化学参数，生物参数

发酵参数

在线检测

直接参数

按检测手段离线检测

间接参数

;二、物理参数的测定

1温度

2空气流量

3罐压??

4搅拌转速

5黏度

6浊度;三、化学参数的测定

溶氧的测定（相对溶氧）;复膜氧电极的结构;2复膜氧电极的工作原理;在阴极表面发生的电极反应：

O2+2H2O+4e-4OH-;

溶氧电极可分为原电池型和电解型（极谱型）。

原电池型简单便宜，不需要外加电压就有电流产生。

电解型（极谱型）：所用的参比电极（阳极:银构成）的电位比阴极(白金或金构成)的高或相等，需极化电压使之维持在-0.6～-0.8V的氧极谱电压内。

;3电极的标定;四、发酵过程的中间体分析

1.1pH

1.2糖含量

1.3氨基氮和氨氮

1.4磷含量

1.5菌浓度和菌形态

1.6产物浓度

;抗生素效价的表示;以最低抑菌浓度(50ml肉汤培养基中完全抑制金黄色葡萄球菌标准菌株发育的最小青霉素剂量）为一个单位，如青霉素0.6微克＝1U;

生物法以抗生素的杀菌能力为衡量效价的标准，其原理恰好与临床应用的要求相一致，而且此法灵敏度高，需用的检品量较小。

但此法得到结果比较慢，需经过16~18小时培养。生物法常用于发酵终了产品效价的测定。;常用的生物法测定抗生素，采用杯碟法;在培养基表面垂直放上小杯，在杯中加入待检样品，加满后在370C培养16~18小时。在培养中,一方面试验菌开始生长另一方面抗生素呈球面扩散，离杯越近，抗生素浓度越大，离杯越远抗生素浓度越小。随着抗生素浓度减小，有一条最低抑菌浓度带，在带范围内，菌不能生长，而呈透明的圆圈，这就叫“抑菌圈”。抗生素浓度越高，抑菌圈越大，;r:抑菌圈的半径(毫米）

M：抗生素在管中的量（单位）

C：最低抑菌浓度（单位/毫升）

H：培养基的厚度（毫米）

L：管子的高