海洋微微型蓝细菌短尾病毒丰度的实时荧光定量PCR分析方法.docx

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2024-07-05 发布于河北
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海洋微微型蓝细菌短尾病毒丰度的实时荧光定量PCR分析方法.docx

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海洋微微型蓝细菌短尾病毒丰度的实时荧光定量PCR分析方法

【摘要】目的：为了实现对海洋微微型蓝细菌短尾病毒的快速精确定量，本文基于rpolB(编码DNA聚合酶的pol基因)基因序列，运用实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）技术，建立一种新型快速灵敏的高通量检测方法，对特异性地对海洋微微型蓝细菌短尾病毒进行绝对定量。方法：通过PCR扩增出目的片段，纯化后与pMD18-T载体连接，转化进入感受态细胞，获得阳性克隆；通过PCR扩增和阳性菌落鉴定，确定质粒完整性和准确性；提取质粒后进行质粒浓度测定，10倍稀释成标准品，并进行实时荧光定量PCR检测分析。结果：利用重组质粒的方法成功建立qPCR方