适用于新高考新教材浙江专版2025届高考生物一轮总复习第9单元生物技术与工程热点练9新情境下基因工程.docVIP

热点练(九)新情境下基因工程的综合应用

1.(2024浙江温州二模)金属硫蛋白(MT)是一类广泛存在于动植物中具有金属结合实力的蛋白质,确定该蛋白质合成的基因结构如图1所示,其中A链为编码链、B链为模板链。科研人员利用图2所示质粒构建枣树的MT基因重组DNA分子并导入大肠杆菌细胞,获得对重金属镉(Cd)具有吸附实力和耐受实力的MT工程菌。

图1

图2

注:XhoⅠ、KpnⅠ、PstⅠ为不同限制酶的识别位点;LacZ基因编码产生的β-半乳糖苷酶可以催化无色物质X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色,否则菌落为白色;ampr基因为氨苄青霉素抗性基因。

回答下列问题。

(1)获得目的基因

提取枣树细胞的,经逆转录获得cDNA。为了使PCR扩增后的产物依据正确的方向与已被酶切的载体连接,克隆MT基因时应选择的引物组合是,并在其(填“5”或“3”)末端分别添加限制酶的识别序列。?

(2)构建重组DNA分子

①启动子是识别并结合的部位;基因工程中构建用于原核生物的表达载体时,常用的启动子不包括以下哪一项?(A.噬菌体基因启动子?

B.乳酸菌基因启动子C.大肠杆菌基因启动子D.枣树MT基因启动子)

②影响DNA连接反应的主要因素除pH与温度等操作环境、反应时间、DNA连接酶的种类及浓度外,还有等(答出1项即可)。?

(3)导入、筛选和鉴定MT工程菌

①将得到的混合物导入到用处理的大肠杆菌完成试验。?

②将菌液稀释并涂布在含X-gal和氨苄青霉素的培育基上进行培育后,随机挑取的单菌落可获得MT工程菌。?

③欲进一步对MT工程菌进行鉴定,可将挑取出的MT工程菌与分别接种至含的LB液体培育基中,置于恒温培育箱中培育,相宜时间后检测菌种数量。

(4)扩大菌种

将MT工程菌接种至发酵罐内进行扩增,培育过程中可定期取样并运用细菌计数板对(填“菌体”或“菌落”)进行干脆计数,以评估增殖状况。发酵结束后,接受(答出1项即可)等方法获得所需的发酵产品。?

2.(2024浙江名校协作体高三二模)番茄的果实养分丰富,是深受人们宠爱的蔬果,但番茄不抗冻,在我国冬季无法栽培。现有科研人员利用转基因技术,将北极海鱼中的抗冻基因转入到了番茄细胞中,从而胜利培育抗冻番茄。导入目的基因的方法是农杆菌转化法,图1为培育过程运用的Ti质粒,已知Vir区的基因活化能促进T-DNA的加工和转移。回答下列问题。

图1

图2

(1)若经过诱变,北极海鱼的一条染色体上的抗冻基因发生了碱基对的替换,导致抗冻实力大大增加,通过琼脂糖凝胶电泳,能否区分突变前后的两个抗冻基因?,请说明理由:?。?

(2)对于目的基因的获得,探讨人员提取了抗冻蛋白,依据氨基酸序列分析了mRNA的碱基序列,继而合成了抗冻基因,通过这种方法得到的目的基因因不含、,故无法扩增和表达。选择图示Ti质粒构建基因表达载体,应选择限制酶(填“Ⅰ”“Ⅱ”或“Ⅲ”),不选其他限制酶的理由是?。?

(3)为筛选胜利导入抗冻基因的番茄细胞,在培育基中添加。将筛选后获得的番茄细胞经过程形成愈伤组织后,经器官发生途径或途径发育形成植株,再在条件下筛选出具有抗冻性状的番茄植株。?

(4)探讨人员欲比较不同转基因番茄中抗冻蛋白的合成量,制备相应的单克隆抗体,利用图2所示原理进行检测。

①检测前,先将抗冻蛋白的单克隆抗体固定在支持物上,然后向该检测体系中加入确定量的番茄植株中提取的蛋白质(待测抗原)和等量酶标记抗冻蛋白(酶标记抗原),目的是让待测抗原、酶标记抗原与抗体结合。?

②保温一段时间后洗涤,再向检测体系中加入确定量的白色底物,若检测体系蓝色越,则说明番茄提取物中抗冻蛋白的含量越高。?

③本检测方法中的单克隆抗体可经杂交瘤细胞体外培育或注射到小鼠腹腔克隆化培育后,分别从、中提取。?

3.(2024浙江名校新高考探讨联盟第三次联考)白细胞介素-6(IL-6)在医学中被广泛应用,科研人员进行了利用大肠杆菌作为生物反应器生产重组人源白细胞介素-6(rhIL-6)的相关试验探讨。回答下列问题。

(1)若利用化学方法合成rhIL-6基因,通常需先依据IL-6的设计出rhIL-6的基因序列,在设计时,还要尽可能依据细胞偏好的密码子。在利用PCR扩增rhIL-6基因时,为提高引物与模板结合的效率,设计引物需避开2个引物或1个引物不同区段的碱基序列。