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还原糖蛋白质脂肪的鉴定

还原糖蛋白质脂肪的鉴定

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1．试验目标

1学会本试验准备

2练习并熟练掌握判定生物组织中可溶性糖、脂肪、蛋白质基础方法。

3学会教学生进行试验探究。

4搞清试验过程中应注意事项，易出现问题及处理方法。

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试验原理：

一些化学试剂能够使生物组织中相关有机化合物产生特定颜色反应

如：糖中还原糖与斐林试剂发生作用能够生成砖红色沉淀；蛋白质与双缩脲试剂发生作用产生紫色反应；脂肪能够被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色。

所以，能够依据与一些化学试剂所产生颜色反应来判定生物组织中糖、蛋白质和脂肪存在

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还原糖判定原理

生物组织中普遍存在还原糖种类较多，常见有葡萄糖、果糖、麦芽糖。它们分子内都含有还原性基团（游离醛基或游离酮基），所以叫做还原糖。蔗糖分子内没有游离半缩醛羟基，所以叫做非还原性糖，不含有还原性。本试验中，用斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在是否，而不能判定非还原性糖。

斐林试剂由质量浓度为0.1g／mL氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g／mL硫酸铜溶液配制而成，二者混合后，马上生成淡蓝色Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2与加入葡萄糖在加热条件下，能够生成砖红色Cu2O沉淀，而葡萄糖本身则氧化成葡萄糖酸。其反应式以下：

CH2OH—(CHOH)4—CHO＋2Cu(OH)2→CH2OH—(CHOH)4—COOH＋Cu2O↓＋2H2O

用斐林试剂判定还原糖时，溶液颜色改变过程为：浅蓝色棕色砖红色(沉淀)。

判定可溶性还原性糖另一个方法：多伦试剂法。多伦试剂即硝酸银氨水溶液，配制方法：取0.3ml2％硝酸银溶液，滴入10％氢氧化钠溶液，再滴入2％氨水溶液，边滴边摇动试管，直到生成沉淀恰好溶解，即得到澄清硝酸银氨水溶液。现用现配。

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蛋白质判定原理

判定生物组织中是否含有蛋白质时，常见双缩脲法，使用是双缩脲试剂。双缩脲试剂成份是质量浓度为0.1g／mL氢氧化钠溶液和质量浓度为0.01g／mL硫酸铜溶液。在碱性溶液(NaOH)中，双缩脲(H2NOC—NH—CONH2)能与Cu2+作用，形成紫色或紫红色络合物，这个反应叫做双缩脲反应。因为蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相同肽键，所以，蛋白质可与双缩脲试剂发生颜色反应。

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供选材料：

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可溶性还原性糖判定：苹果含果糖较高，试验效果也很显著，且轻易在市场上买到。但要注意，苹果组织液必须暂时制备，切勿保留时间过长。因为苹果多酚氧化酶含量较高，组织液很轻易被氧化成褐色，将反应产生颜色覆盖。温度高时，氧化速度更加快。而梨和白心萝卜组织液不会有这种现象出现。

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蛋白质判定：鸡蛋清：蒸馏水=1:9混合均匀，再用4层纱布过虑，放入滴瓶中备用，这么配制蛋清溶液与双缩脲试剂反应后不会粘固在试管内壁上，反应也彻底，试管也轻易洗刷洁净。

也能够用浓豆浆代替蛋清溶液

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器材

显微镜、双面刀片、试管、试管夹、大烧杯、酒精灯、三脚架、石棉网、试管架、载玻片、吸水纸、电炉。

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试剂配制：

斐林试剂

甲液

氢氧化钠质量浓度0.1g/ml溶液

乙液

硫酸铜质量浓度0.05g/ml溶液

使用时暂时配制，将4滴～5滴乙液滴入2ml甲液中，配完马上使用。

与斐林试剂原理一样本尼迪试剂配制后可长久保留，配方以下：无水硫酸铜1.74g溶于100ml热水中冷却后加至150ml。取柠檬酸钠173g，无水碳酸钠100g和600ml水共热，溶解后冷却并加水至850ml。再将冷却150ml硫酸铜溶液倾入即可。

苏丹III溶液配制

称取0.1g苏丹III或IV干粉，溶于50ml丙酮中，再加入70％酒精50ml即可使用。

苏丹Ⅳ溶液配制

称取0.1g苏丹Ⅳ干粉，溶于50mL丙酮中，再加入体积分数为70%酒精50mL，充分混合后即可使用。

双缩脲试剂配制：

取10g氢氧化钠放入量筒中，加水至100ml，待充分溶解后倒入试剂瓶中，配成氢氧化钠质量浓度为0.1g/ml溶液，瓶口上塞上胶塞，贴上标签：试剂A

取1g硫酸铜放入量筒中，加水至100ml，待充分溶解后倒入试剂瓶中，配成硫酸铜质量浓度为0.01g/ml溶液（蓝色），瓶口上塞上胶塞，贴上标签：试剂B

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方法及步骤：

一、还原糖判定

1.制备生物组织样液

（1）将洗净苹果切成小块。（2）取几小块（5g）放入研钵中，加少许石英砂研磨，再加5ml水，继续研磨。（3）将玻璃漏斗插入试管中，在漏斗上垫一层纱布，将研磨液过滤。

2.试验操作方法和观察

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