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血细胞P53基因表示检测——RT-PCR湘雅医检1501血细胞P五三基因表达检测专家讲座第1页

P53基因P53基因命名该基因编码一个分子量为53kDa蛋白质功效作用主要抑癌基因，预防癌变细胞基因修复功效血细胞P五三基因表达检测专家讲座第2页

RT-PCRRT-PCR(反转录PCR技术)RNA反转录（reversetranscription）和cDNA聚合酶链式扩增（PCR）相结合技术。血细胞P五三基因表达检测专家讲座第3页

在GenBank中查找p53基因设计引物确定参数检测p53基因在血细胞中表示反转录引物五个主要问题基因表示检测方法血细胞P五三基因表达检测专家讲座第4页

基因表示检测方法Ques血细胞P五三基因表达检测专家讲座第5页

在蛋白质水平基因检测方法在DNA水平在mrna水平Northern印记杂交RT-PCR.......血细胞P五三基因表达检测专家讲座第6页

ReverseTranscriptionPCRRNA提取cDNA反转录PCRNorthern印记杂交Northern印记杂交基因表示水平随机六核苷酸引物引导Oligo(dT)引导特异性引导血细胞P五三基因表达检测专家讲座第7页

反转录Ques血细胞P五三基因表达检测专家讲座第8页

反转录酶逆转录酶（reversetranscriptase）是存在于RNA病毒体内依赖RNADNA聚合酶，最少含有以下三种活性：(1)依赖RNADNA聚合酶活性：以RNA为模板合成cDNA第一条链；(2)Rnase水解活性：水解RNA:DNA杂合体中RNA；(3)依赖DNADNA聚合酶活性：以第一条DNA链为模板合成互补双链cDNA.

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反转录可用引物010305Oligo(dT)：是一个对mRNA特异方法。因绝大多数真核细胞mRNA含有3’端Poly(A)尾，此引物与其配对，仅mRNA可被转录。随机六聚体引物：用此种方法时，体系中全部RNA分子全部充当了cDNA第一链模板，PCR引物在扩增过程中赋予所需要特异性。通惯用此引物合成cDNA中96%起源于rRNA。特异性引物：用含目标RNA互补序列寡核苷酸作为引物，用这类引物仅产生所需要cDNA，造成更为特异PCR扩增。血细胞P五三基因表达检测专家讲座第10页

GENBANK中查找P53基因Ques血细胞P五三基因表达检测专家讲座第11页

查找P53序列使用genbank，p53登陆号AH007667/genbank血细胞P五三基因表达检测专家讲座第12页

查找P53序列血细胞P五三基因表达检测专家讲座第13页

查找P53序列血细胞P五三基因表达检测专家讲座第14页

查找P53序列血细胞P五三基因表达检测专家讲座第15页

引物设计标物应用核酸系列保守区内设计并含有特异性产物不能形成二级结构引物长度普通在15~30碱基之间G+C含量在40%~60%之间碱基要随机分布引物本身及之间不能有连续4个碱基互补引物5′端能够修饰引物3’端不可修饰引物3′端要避开密码子第3位血细胞P五三基因表达检测专家讲座第16页

设计引物确定参数Ques血细胞P五三基因表达检测专家讲座第17页

引物设计Primerpremier5.0Primer?Premier5.0是由加拿大Premier企业开发专业用于PCR或测序引物以及杂交探针设计、评定软件，其主要界面分为序列编辑窗口（Genetank），引物设计窗口（Primer?Design），酶切分析窗口（Restriction?Sites）和纹基分析窗口（Motif），这里我们主要介绍其引物设计功效。血细胞P五三基因表达检测专家讲座第18页

引物设计1开启界面血细胞P五三基因表达检测专家讲座第19页

引物设计2在此输入需扩增DNA序列血细胞P五三基因表达检测专家讲座第20页

引物设计3血细胞P五三基因表达检测专家讲座第21页

引物设计4血细胞P五三基因表达检测专家讲座第22页

引物设计5血细胞P五三基因表达检测专家讲座第23页

引物设计6血细胞P五三基因表达检测专家讲座第24页

引物设计7血细胞P五三基因表达检测专家讲座第25页

引物设计8Hairpin：发夹结构Dimer：二聚体FalsePriming：错配CrossDimer：交叉二聚体血细胞P五三基因表达检测专家讲座第26页

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引物设计10血细胞P五三基因