通过CRELOXP重组酶系统对四膜虫基因N端进行表位附加的构建.pptxVIP

通过CRELOXP重组酶系统对四膜虫基因N端进行表位附加的构建.pptx

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contents;一.背景知识

;当前对四膜虫C端蛋白标识技术已经完成,多数情况下蛋白标识位于C端,这么抗药标识极少会干扰到N端开启子。但其N端蛋白标识技术仍有研究需要。作者先前试验中发觉有些蛋白在C端标识时出现功效异常或干扰与其它蛋白相互作用等。

N端蛋白标识考虑方面:

1.不会干扰开启子功效

2.不会影响下游基因正确翻译

3.基因同源重组时N端表位附加不会丢失

Cre/loxP重组酶系统能够处理上述问题

;Cre/loxP重组酶系统;loxP位点;a.基因序列插入(图1A);

b.同向位点之间序列缺失(图1B);

c.两个反向位点之间序列颠倒(图lC)。;构建思绪;二.内容介绍;1.Cre重组酶定位于四膜虫大核中

;;;;从E图中能够发觉在Cre556(一类含HA-cre1基因表示四膜虫群体)大部分內源MTT1基因被HA-cre1表示结构取代。

在Cre556系中HA-cre1基因能否表示是接下来需要做工作。;;;2.Cre重组酶表示抑制了四膜虫生长;;3.Cre重组酶在LoxP位点上发生准确重组;;;4.Cre/loxP系统用于N端表位附加;;

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