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选修3易考知识点背诵
专题1基因工程
基因工程的概念
基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计
,通过体外DNA重组和转基因技术,赋予生物以新的
遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和
生物产品。基因工程是在DNA分子水平上进行设计和
施工的,又叫做DNA重组技术。
(一)基因工程的基本工具
1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶(限制酶)
(1)来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的。
(2)功能:能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷
酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个
核苷酸之间的磷酸二酯键断开,因此具有专
一性。
(3)结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有
两种形式:黏性末端和平末端。
2.“分子缝合针”——DNA连接酶
(1)两种DNA连接酶(E·coliDNA连接酶和TDNA连
4-
接酶)的比较:
①相同点:都缝合磷酸二酯键。
②区别:E·coliDNA连接酶来源于T噬菌体,只能将
4
双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二
1
酯键连接起来;而TDNA连接酶能缝合两种
4
末端,但连接平末端的之间的效率较低。
(2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核
苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯
键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端,形成
磷酸二酯键。
3.“分子运输车”——载体
(1)载体具备的条件:①能在受体细胞中复制并稳定
保存。
②具有一至多个限制酶切点,
供外源DNA片段插入。
③具有标记基因,供重组DNA
的鉴定和选择。
(2)最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简
单的、独立于细菌染色体之外,并具有自我复制
能力的双链环状DNA分子。
(3)其它载体:噬菌体的衍生物、动植物病毒
(二)基因工程的基本操作程序
第一步:目的基因的获取
1.目的基因是指:编码蛋白质的结构基因。
2.原核基因采取直接分离获得,真核基因是人工合成
。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学
合成法_。
3.PCR技术扩增目的基因
2
(1)原理:DNA双链复制
(2)过程:第一步:加热至90~95℃DNA解链;第二
步:冷却到55~60℃,引物结合到互补DNA链;第三
步:加热至70~75℃,热稳定DNA聚合酶从引物起始
互补链的合成。
第二步:基因表达载体的构建
1.目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可
以遗传至下一代,使目的基因能够表达和发挥作用。
2.组成:目的基因+启动子+终止子+标记基因
(1)启动子:是一段有特殊结构的DNA片段,位于基
因的首端,是RNA聚合酶识别和结合的部位,能驱动
基因转录出mRNA,最终获得所需的蛋白质。
(2)终止子:也是一段有特殊结构的DNA片段,位
于基因的尾端。
(3)标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中是否含
有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
常用的标记基因是抗生素基因。
第三步:将目的基因导入受体细胞_
1.转化的概念:是目的基因进入受体细胞内,并且在
受体细胞内维持稳定和表达的过程。
2.常用的转化方法:
将目的基因导入植物细胞:采用最多的方法是农杆菌
转化法,其次还有基因枪法和花粉管通道法等。
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