一种微囊藻毒素单克隆抗体及其制备方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(10)申请公布号CN101125889A

(43)申请公布日2008.02.20

(21)申请号CN200710119212.1

(22)申请日2007.07.18

(71)申请人清华大学

地址100084北京市海淀区清华园

(72)发明人何苗盛建武施汉昌

(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司

代理人关畅

(51)Int.CI

C07K16/18

G01N33/577

C12N5/18

权利要求说明书说明书幅图

(54)发明名称

一种微囊藻毒素单克隆抗体及其制

备方法与应用

(57)摘要

本发明公开了一种微囊藻毒素单克

隆抗体及其制备方法与应用。本发明的微

囊藻毒素单克隆抗体是微囊藻毒素－LR的

单克隆抗体，它按照包括以下步骤的方法

制备：1)在微囊藻毒素－LR的第七位氨基

酸残基N－甲基脱氢丙氨酸上引入一个氨

基，得到经氨基修饰的微囊藻毒素－LR多

肽；将该经氨基修饰的微囊藻毒素－LR多

肽与载体蛋白偶联得到完全抗原A；2)将

步骤1)的完全抗原A免疫小鼠，取免疫小

鼠的脾细胞，与小鼠骨髓瘤细胞融合，筛

选出阳性杂交瘤细胞株；培养所述阳性杂

交瘤细胞株或将所述阳性杂交瘤细胞株注

入同系小鼠腹腔诱生腹水，得到微囊藻毒

素－LR的单克隆抗体。该单克隆抗体可用

于微囊藻毒素－LR的检测及其免疫亲和纯

化。

法律状态

法律状态公告日法律状态信息法律状态

权利要求说明书

1.一种制备微囊藻毒素-LR的单克隆抗体的方法，包括以下步骤：

1)在微囊藻毒素-LR的第七位氨基酸残基N-甲基脱氢丙氨酸上引入一个氨基，

得到经氨基修饰的微囊藻毒素-LR；再将该经氨基修饰的微囊藻毒素-

LR与载体蛋白偶联得到完全抗原A；

2)将步骤1)的完全抗原A免疫小鼠，取免疫小鼠的脾细胞，与小鼠骨髓瘤细

胞融合，筛选出阳性杂交瘤细胞株；培养所述阳性杂交瘤细胞株或将

所述阳性杂交瘤细胞株注入同系小鼠腹腔诱生腹水，得到微囊

藻毒素-LR的单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中，用2-巯

基乙胺在微囊藻毒素-LR的第7位氨基酸残基上引入一个氨基。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中的载体蛋白为牛

血清白蛋白；所述偶联方法为戊二醛法。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中用于免疫的小鼠

为Balb/c小鼠；免疫方法为：每只小鼠每次免疫所用的所述完全抗原剂A

量为15-40μg，两次免疫的间隔时间为20-40天；免疫方式为皮下

多点注射；

所述步骤2)中的小鼠骨髓瘤细胞为小鼠骨髓瘤细胞SP2/0。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中的筛选阳性杂交

瘤细胞株的方法为：先用包被抗原筛选，再用微囊藻毒素-LR单体筛选至少

1次；所述包被抗原为将所述步骤1)中的经氨基修饰的微囊藻毒素-

LR多肽与载体蛋白偶联得到的完全抗原B；所述完全抗原B与所

述完全抗原A中的载体蛋白不相同。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述阳性杂交瘤细胞株为能分

泌抗Microcystin-LR单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株MC8C10，其保藏号为

CGMCC