免疫学检验-自考重点.pdf

抗原抗体反应

IgG为单体分子，是血清和细胞外液中含量最高的Ig

血清中的IgM为五聚体，因此血清IgM水平升高提示有近期感染，有助于感染性疾病的早期诊断。

抗原抗体反应的原理：①抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原表位与抗体超变区分子间的结构互补性

与亲和性，这两种特性是由抗原与抗体分子的一级结构决定的；②抗原和抗体的结合完全依靠非共

价键的相互作用，并且抗原复合物和游离成分之间保持动态平衡；③抗原抗体的结合使电荷减少或

消失，电子云也消失，蛋白质由亲水胶体转化为疏水胶体。

范德华引力提供的作用力最小，疏水作用力提供的作用力最大。

亲和力：是指抗体分子上一个抗原结合位点与对应的抗原表位之间相适应而存在着的引力，它是抗原抗

体间固有的结合力。抗体超变区与抗原表位之间分子空间构型的吻合程度影响着抗体亲和力。吻合

程度越高，亲和力越高。

亲和力可用亲和常数K来表示：K=K/K=【Ab-Ag】/【Ab】×【Ag】

AA12

（KA表示抗原抗体结合的稳定性和亲和力；K1表示结合常数；K2为解离常数；【Ab-Ag】表示抗原抗

体复合物的摩尔浓度；【Ab】或【Ag】分别表示游离的抗体或抗原结合位点的摩尔浓度）

KA值越大，【Ab-Ag】浓度越大，亲和力越高，抗体与抗原结合越牢固，反之抗原抗体复合物就容易解

离。

带现象：在等价带前后分别为抗体过剩或抗原过剩，形成的沉淀物少或无，这种现象在免疫测定中称为

带现象。出现在抗体过量时，称为前带；出现在抗原过量时，称为后带（概念）

改变pH和增加离子强度是最常有的促解离方法

抗原抗体的纯化

差速离心的分离效果是粗分离，适用于分子量相差大、不稳定、易变形的物质。常用于分离细胞器和病

毒。

常用的中性盐是硫酸铵，其优点是：①溶解度大；②温度系数小；③密度小；④价廉易得

高浓度盐析法是由于盐分子与蛋白质分子极化部位相互作用，降低了蛋白质分子的亲水性而将其分级分

离，是粗纯样品的重要方法

盐析法是纯化蛋白质常用的粗提方法

凝胶层析是利用物质的相对分子量不同而达到分离的一种层析技术。

常用的凝胶有：葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶以及聚丙烯酰胺和琼脂糖之间的交联物。

纯化抗血清先用盐析法粗提，再用亲和层析法纯化。

亲和层析的原理是利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。

亲和层析一次纯化即可得到很纯的物质。

常用的载体有纤维素、琼脂糖凝胶、交联葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶和多孔玻璃珠等。

免疫原和特异性抗体的制备

多克隆抗体制备与操作要点：1、抗原的制备与纯化2、佐剂的制备3、佐剂与Ag的乳化4、动物

的选择5、动物的免疫（时间、剂量、途径）6、试血7、采取并收集血清8、血清的纯化、

鉴定、保存（可溶性抗原，颗粒性抗原物2、3）

免疫间隔时间是抗血清制备中的重要因素，一般第一次免疫后间隔时间以10-20d为宜。第二次后每次的

间隔一般为7-10d

颗粒性抗原用静脉注射，如抗原极为宝贵可采用淋巴结内微量注射法，抗原只需10-100ug即可获得较好

的免疫效果

同抗原一起或预先注射到机体内，能增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的非特异性免疫

增强性物质，称为免疫佐剂，简称佐剂

在抗血清制备中应用佐剂的目的是:为了提高抗原的免疫原性，从而增强体液免疫和细胞免疫的水平，获

得高效价抗体。

弗氏完全佐剂（CFA）是：石蜡油+羊毛脂+卡介苗

弗氏不完全佐剂（IFA）是：石蜡油+羊毛脂

HAT培养基的组成与作用：（重要）

组成：HAT培养基是由入次黄嘌呤（hypoxanthine,H）、氨基蝶呤(aminopterin,A)、和胸腺嘧啶核苷

(thymidine,T)组成

作用:氨基蝶呤（A）为叶酸拮抗物，用以阻断细胞合成DNA的主要途径；次黄嘌呤（H）和胸腺

嘧啶核苷（T）提供核苷酸合成的前体，使细胞能通过替代途径合成DNA

有限稀释法：最终使每个培养孔内平均含有1个细胞（理论上，实际每孔是0个或1个或2个）

目前最有效的单克隆抗体纯化方法为亲和层析法

沉淀反应

常用的凝胶有琼脂、琼脂糖、聚丙烯酰胺等

Fabey曲线，适用与小分子抗原和较短时间（24h）的结果处理

对流免