基因工程在微生物中的应用.ppt

（2）转基因间接影响（未预料基因多效性）：经遗传工程修饰的基因片段导入后，引发基因突变或改变代谢途径，致使其最终产物可能含有新的成分或改变现有成分的含量所造成的间接影响；常规育种中筛除不利性状进行实质等同性鉴定食物安全性因素（3）植物里导入了具有抗除草剂或毒杀虫功能的基因后，它是否也象其他有害物质一样能通过食物链进入人体内；人体内需要有该毒蛋白的受体毒蛋白需在人体内积累到足够的量食物安全性因素（4）转基因食品经由胃肠道的吸收而将基因转移至胃肠道微生物中，从而对人体健康造成影响1.标记基因和目的基因有无直接毒性任何DNA都由4种碱基组成DNA在小肠中仅有200mg标记基因DNA在结肠中仅有0.3-1pg，在消化道中是微不足道的DNA在消化道中很快被降解WHO、FDA实验证明食物中的转基因DNA本身无安全性问题食物安全性因素2.基因水平转移的可能性DNA被降解成小片段或核苷酸，在进入肠道微生物存在的小肠下段，盲肠及结肠前已被降解。即使DNA完整存在，DNA转移并整合需要有感受态的细胞，其过程非常复杂，同时小肠上皮细胞新陈代谢，半衰期很短，不断被取代，不可能保存下来。3．标记基因编码蛋白的安全性包括直接毒性、过敏性、因蛋白的催化功能而产生副作用蛋白在消化道中很降解与毒性蛋白无同源性标记基因无特殊设计，不能忍受极端环境，因此会很快被降解食物安全性因素公众为什么关心标记基因的安全性？尽管国际社会认为大部分常用的标记基因是安全的，但仍有一部分标记基因的安全性未能确定；所谓的安全使用的标记基因，仅指基因本身，并不包括启动子、终止子、基因多效性及其它多种可能的次生效应，次生效应可因插入位点不同而异。常见标记基因:

(1)抗卡那霉素基因

(2)抗潮霉素基因

(3)抗草甘膦基因

(4)GUS报告基因

(5)GFP报告基因转基因植物中35S启动子的生物安全性启动子是基因表达所必需的，决定了外源基因表达空间、表达时间和表达强度等，是人们定向改造生物的重要限制因素。最常用的启动子是35S启动子，该启动子能够在植物组织中高水平表达。因此已经被引入许多转基因植物中。潜在风险问题:35S启动子内有一重组热点。（1）如果35S启动子插入到隐性病毒基因组旁，可能会重新活化病毒。（2）启动子插入到某一编码毒素蛋白的基因上游，可能会增强该毒素的合成。解决转基因食物安全性的策略对目的基因编码蛋白进行详细分析，避免引入过敏蛋白和过敏蛋白同源序列用甘露糖或荧光蛋白基因代替抗菌素类作为筛选标记采用基因工程手段剔除抗菌素类标记基因采用组织、器官特异性启动子、诱导性启动子基因组编辑技术是一种可以在基因组水平上对DNA序列进行改造的遗传操作技术。这种技术的原理是构建一个人工内切酶，在预定的基因组位置切断DNA，切断的DNA在被细胞内的DNA修复系统修复过程中会产生突变，从而达到定点改造基因组的目的。通过修复途径，基因组编辑技术可以实现三种基因组改造，即基因敲除，特异突变的引入和定点转基因基因组编辑技术CRISPR-Cas9介导的基因组精确编辑技术

CRISPRs技术是一种由RNA指导Cas蛋白对靶向基因进行修饰的技术。CRISPR(clustered,regularlyinterspaced,shortpalindromicrepeats成簇的规律间隔的短回文重复序列)是一种来自细菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。在该机制中，Cas蛋白（CRISP‐associatedprotein）含有两个核酸酶结构域，可以分别切割两条DNA链。一旦与crRNA（CRISPRRNA）和tracrRNA结合形成复合物，Cas蛋白中的核酸酶即可对与复合物结合的DNA进行切割。切割后DNA双链断裂从而使入侵的外源DNA降解。2、环境安全性因素转基因生物对农业和生态环境的影响;（1）产生超级杂草的可能；植物在获得新的基因后会不会增加其生存竞争性，在生长势、越冬性、种子产量和生活力等方面是否比非转基因植株强。若转基因植物可以在自然生态条件下生存，势必会改变自然的生物种群，打破生态平衡。从目前在水稻、玉米、棉花、马铃薯、亚麻、芦笋等转基因植物的田间试验结果来看，转基因植物在生长势、越冬能力等方面并不比非转基因植株强，也就是说大多数转基因植物的生存竞争力并没有增加，故一般不会演变为农田杂草（2）种植抗虫转基因作物后可能使害虫产生免疫并遗传、从而产生更加难以消灭的“超级害虫”；在植物基因工程中所用的许多基因是与抗虫或抗病性有关的，其直接作用对象是生物。如转入Bt杀虫基因的抗虫棉