含牛轮状病毒VP6的嵌合型HBcAg颗粒抗原的制备及其免疫原性分析.pptxVIP

含牛轮状病毒VP6的嵌合型HBcAg颗粒抗原的制备及其免疫原性分析汇报人：2024-01-24

CATALOGUE目录引言材料与方法结果与分析嵌合型HBcAg颗粒抗原的免疫原性机制探讨嵌合型HBcAg颗粒抗原的应用前景结论与展望

01引言

牛轮状病毒（BovineRotavirus，BRV）是引起幼畜腹泻的重要病原之一，给畜牧业造成巨大经济损失。目前，预防和控制BRV感染的主要手段是疫苗接种，但传统疫苗存在安全性、免疫原性等问题。因此，开发新型、安全、高效的BRV疫苗具有重要意义。研究背景和意义

国内外研究现状及发展趋势国内外已有多种BRV疫苗上市，包括灭活疫苗、减毒活疫苗和基因工程疫苗等。其中，基因工程疫苗具有安全性高、易于生产和改造等优点，是BRV疫苗研究的热点。目前，基因工程疫苗的研究主要集中在病毒样颗粒（Virus-LikeParticles，VLPs）和重组蛋白疫苗方面。

本研究旨在制备含牛轮状病毒VP6的嵌合型HBcAg颗粒抗原，并分析其免疫原性。通过将BRV的VP6蛋白与乙型肝炎核心抗原（HepatitisBCoreAntigen，HBcAg）进行嵌合，利用HBcAg自组装成颗粒的特性，制备出具有良好免疫原性的疫苗候选分子。本研究将为开发新型、安全、高效的BRV疫苗提供重要的理论和实践依据。研究目的和意义

02材料与方法

材料牛轮状病毒VP6基因从牛轮状病毒中提取VP6基因，作为嵌合型HBcAg颗粒抗原的构建基础。乙型肝炎核心抗原（HBcAg）基因从乙型肝炎病毒中提取HBcAg基因，用于构建嵌合型抗原。表达载体选用适当的表达载体，如pET系列载体，用于构建重组质粒。宿主细胞选用大肠杆菌BL21(DE3)等常用表达宿主细胞。

基因克隆与重组质粒构建通过PCR扩增VP6基因和HBcAg基因，将两者连接并克隆到表达载体中，构建重组质粒。将重组质粒转化到宿主细胞中，诱导表达重组蛋白。通过破碎细胞、离心、层析等步骤纯化重组蛋白。将纯化的重组蛋白进行自组装，形成嵌合型HBcAg颗粒抗原。通过动物实验和细胞实验等方法，分析嵌合型HBcAg颗粒抗原的免疫原性。包括免疫动物后抗体滴度的测定、细胞免疫应答的评价等。重组蛋白的表达与纯化嵌合型HBcAg颗粒抗原的制备免疫原性分析方法

ABCD分组设计设立实验组和对照组，实验组接种嵌合型HBcAg颗粒抗原，对照组接种空白对照或已知免疫原性的抗原。样本收集与处理在免疫前、免疫后不同时间点收集血清、组织等样本，进行相应的处理和保存。数据分析对实验数据进行统计分析，比较实验组和对照组之间的差异，评估嵌合型HBcAg颗粒抗原的免疫原性。免疫方案确定免疫途径、免疫剂量和免疫次数等免疫方案。实验设计

03结果与分析

03纯化与鉴定通过亲和层析等方法对表达的嵌合型HBcAg颗粒抗原进行纯化和鉴定，获得了高纯度的目的蛋白。01重组质粒的构建成功构建了含牛轮状病毒VP6基因和乙型肝炎核心抗原（HBcAg）基因的重组质粒。02嵌合型HBcAg颗粒抗原的表达将重组质粒转染至真核表达系统，实现了嵌合型HBcAg颗粒抗原的高效表达。嵌合型HBcAg颗粒抗原的制备

动物免疫实验测定免疫小鼠血清中特异性抗体的滴度，结果显示抗体滴度随时间推移逐渐升高。抗体滴度测定细胞免疫应答分析分析免疫小鼠的细胞免疫应答情况，结果显示嵌合型HBcAg颗粒抗原能够刺激小鼠产生细胞免疫应答。将嵌合型HBcAg颗粒抗原免疫小鼠，结果显示小鼠产生了针对牛轮状病毒VP6和HBcAg的特异性抗体。免疫原性分析

通过动物免疫实验和抗体滴度测定，证明了嵌合型HBcAg颗粒抗原具有良好的免疫原性，能够刺激机体产生特异性抗体。细胞免疫应答分析结果表明，嵌合型HBcAg颗粒抗原不仅能够刺激体液免疫应答，还能够刺激细胞免疫应答，这对于预防病毒感染具有重要意义。嵌合型HBcAg颗粒抗原的制备成功为牛轮状病毒和乙型肝炎病毒的联合疫苗研究提供了新思路。结果讨论

04嵌合型HBcAg颗粒抗原的免疫原性机制探讨

VP6蛋白的结构与功能VP6蛋白是牛轮状病毒的主要内层衣壳蛋白，具有高度的保守性和免疫原性。VP6蛋白的结构特点包括其由多个亚单位组成的寡聚体形式，以及特定的表面环状结构和内部疏水核心。VP6蛋白在病毒感染过程中发挥重要作用，如参与病毒粒子的组装和稳定性维持，以及与宿主细胞的相互作用。

嵌合型HBcAg颗粒抗原与免疫系统的相互作用01嵌合型HBcAg颗粒抗原能够模拟天然病毒粒子的结构，从而被免疫系统有效识别。02该抗原通过表面的抗原表位与免疫细胞表面的受体结合，激活免疫应答。嵌合型HBcAg颗粒抗原能够诱导产生针对VP6蛋白的特异性抗体和细胞免疫应答。03

嵌合型HBcAg颗粒抗原的免疫原性主要来源于其模拟天然病毒粒子的结构和抗原表位的展示。