基因工程的基本操作程序课件（第2课时）(共37张PPT1个视频)高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

第3章基因工程

第二节

基因工程的基本操作程序

(第二课时)

思考：获取了足够量的目的基因后，能直接把目的基因导入受体细胞吗?

二、基因表达载体的构建——基因工程的核心

(一)目的：①让基因在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代；

(二)组成：②使目的基因能够表达和发挥作用

基因表达载体=启动子+目的基因+终止子+标记基因+复制原点

(若需要能完成自主复制，还应有复制原点)

限制酶切割位点，

插入目的基因

这

思考：启动子有哪些类型?

①组成型启动子：每种组织器官中均发挥作用。

②组织特异型启动子：特定组织器官中才能发挥作用。

③诱导型启动子：特定条件下刺激才能发挥作用。

目的基因插入位点不是随意的：基因表达载体需要启动子与终止子的调控，所以目的基因应插入启动子和终止子之间的部位，

若目的基因插入启动子部位，启动子将失去原功能。

思考：目的基因该插入什么位置?

激活或抑制目的基因表达

诱导型启动子：

诱导型启动子

诱导物

作用

思考：“载体”=“基因表达载体”?

载体≠基因表达载体

二者都有：标记基因和复制原点两部分DNA片段。

基因表达载体：在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子。

原因：

①生物之间进行基因交流，只有使用受体生物自身基因的启动子才能比较有利于基因的表达；②通过cDNA文库获得的目的基因没有启动子，只将编码序列导入受体生物中无法转录；

③目的基因导入受体生物中需要有筛选标记；

④为了增强目的基因的表达水平，往往还要增加一些其他调无件，如增强子等；

⑤有时需要确定目的基因表达的产物存在于细胞的什么部位，往往要加上可以标识存在部位的基因或做成目的基因与标记基因的融合基因，如绿色荧光蛋白基因。

启动子(DNA分子中)≠起始密码子(mRNA分子中)

终止子(DNA分子中)≠终止密码子(mRNA分子中)

思考：“启动子”=“起始密码子”?“终止子”=“终止密码子”?

非编码区编码区非编码区编码区上游编码区下游

终止子

复制原点-

启动子

终止子

插入目的基因

DNA连接酶

重组DNA分子

(重组质粒)

思考：该过程需要用到基因工程哪些工具酶?

载体

DNA分子

(质粒)

(含目的基因)

三、基因表达载体的构建过程：

G

CTTAA

目的基因

带有相同黏性末端或平末端的目的基因片段

带有黏性末端或平末端的切口

酶切后产生开环质粒

同一种限制酶处理

重组DNA分子

AATTC一G-

一、目的基因的筛选与获取

1.目的基因

(1)概念：用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因

(2)种类：编码蛋白质的基因(主),具有调控作用的因子(次)

注意：不是所有的基因都编码蛋白质或肽链。

基因的种类一般分为结构基因、转录基因和调控基因。

结构基因的功能：

具有转录和翻译功能，能控制生物性状(编码蛋白质或肽链)。

转录基因的功能：

只有转录功能，没有翻译功能，能转录形成tRNA和rRNA。

调控基因的功能：

不能进行转录和翻译，只能调控其他基因的表达。

思考：如何防止自身环化和反向连接的问题?

双酶切：选择2种不同的限制酶同时对目的基因和质粒切割，得到两种

不同的末端，可减少自身环化及反向连接等问题出现。

目的基因自连

质粒自连

目的基因与质粒连接

51

目的基因

L2

2

载体

思考：使用同一种DNA限制酶进行切割，会得到几种重组DNA?有何缺点?怎么改进?

正向连接

21

1’

2’

反向连接

2,1’

2’

目的基因与目的基因连接

片段间的连接

质粒与质粒连接

自连

双酶切

-G

-CTTAA

-A

-TCTAG

双酶切：切出的黏性末端不能再碱基互补配对

表达载体

表达载体

fcok

GA

复

原点

复制原点

因

EcoRI

g

EcoRI

花粉管通道法——我国科学家独创

农杆菌转化法(主要)

基因枪法(了解)

——显微注射法

——Ca²+处理法(又叫感受态细胞法)

(一)方法

将目的基因导入

植物细胞

将目的基因导入

动物细胞

将目的基因导入

微生物细胞

受精卵或体细胞

主要是：受精卵

主要是：原核细胞

三、将目的基因导入受体细胞

方法1:用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中

方法2:在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道进入胚囊。

受体细胞：受精卵(或合子或早期胚胎细胞)

(1)花粉管通道法(我国科学家独创)

农杆菌是生活在土壤中的微生物，自然条件下