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生物科技行业第二章细胞生物学
研究方法
第二章细胞生物学研究方法
(theresearchmethodinthecellbiology)
教学目的
1、了解主要工具和常用方法,侧重掌握基本原理和基本应用;
2、认识工具和方法和学科发展的相关性。
教学内容
本章从以下5个方面介绍了细胞生物学的研究方法:
1.显微成像技术
2.细胞化学技术
3.细胞分选技术
4.细胞工程技术
5.分离技术
6.分子生物学方法
计划学时及安排
本章计划3学时。
教学重点和难点
生命科学是实验科学,它的很多成果都是通过实验才得以发现和发展的。许多细胞生
物学的重要进展以及新概念的形成,往往来自新技术的应用。因此,方法上的突破,对于理
论和应用上的发展具有巨大的推动作用,这是学习本章应确立的基本思想。
1.显微成像包括直接成像和间接成像。显微技术是细胞生物学最基本的研究技术,包
括光学显微技术和电子显微技术。在光学显微技术中要掌握几种常用显微镜成像的基本原
理,包括普通双筒显微镜、荧光显微镜、相差显微镜、暗视野显微镜、倒置显微镜。电子
显微镜是研究亚显微结构的主要工具,透射和扫描电镜的是俩类主要的电子显微镜,对其
基本结构、工作原理和样品制备方法则是学习的重点。
2.细胞化学技术介绍了酶细胞化学技术、免疫细胞化学技术、细胞分选技术,其中流
式细胞分选技术是细胞生物学和现代生物技术中的重要技术,应重点掌握。
3.细胞工程技术是细胞生物学和遗传学的交叉领域,主要利用细胞生物学的原理和
方法,结合工程学的技术手段,按照人们预先的设计,有计划地改变或创造细胞遗传性的
技术。包括体外大量培养和繁殖细胞,或获得细胞产品、或利用细胞体本身。主要内容包
括:细胞融合、细胞生物反应器、染色体转移、细胞器移植、基因转移、细胞及组织培养。
4.分离技术是壹大类技术的总称,包括细胞组分的分离和生物大分子的分离,应掌握
各种分离技术的原理和用途。
本章对分子生物学方法作了简要介绍,为今后的学习奠定基础。简言之,本章教学重点是仪
器方法的基本原理和基本应用;教学难点是电镜制样及分子杂交技术。
教学方法讲授、参观
教学过程
2.1显微成像技术
2.1.1、光学和电子显微镜成像原理
共同点:照明系统;被观察的样品;聚焦和成像的透镜系统
不同点:
•光学显微镜:以可见光(或紫外线)为光源。
•电子显微镜:以电子束为光源。
表3-1电镜和光镜的比较
电镜和光镜光路图比较电子显微镜的基本构造
2.2.2、常用的光学显微镜
⑴普通光学显微镜
◆构成:
•①照明系统
•②光学放大系统
•③机械装置
◆原理:经物镜形成倒立实像,经目镜进壹步放大成像。
◆分辨力:指分辨物体最小间隔的能力。
•R=0.61λ/nsin(α/2)或者R=0.61λ/N.A.
其中λ为入射光线波长;N.A.为物镜的数值孔径(numericalaperture),
sinα/2,n=介质折射率;α=镜口角(样品对物镜镜口的张角)。
•思考:如何提高显微镜的分辨能力?
◆显微镜的几个光学特点:
•制作光学镜头所用的玻璃折射率为1.65-1.78,所用介质的折射率越接近玻璃的越好。
•sinα/2的最大值必然小于1;介质为空气,镜口率壹般为0.05-0.95;油镜头用香
柏油为介质,镜口率可接近1.5。
•普通光线的波长为400-700nm,分辨力数值不会小于0.2μm,人眼的分辨力为
0.2mm,因此显微镜的最大设计倍数为1000X。
⑵荧光显微镜(Fluorescencemicroscope)
•特点:光源为紫外线,波长较短;
分辨力高于普通显微镜;
有俩个特殊的滤光片;
照明方式通常为落射式。
•用
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