甘蔗叶片赤腐病抗性评价技术规程.pdfVIP

甘蔗叶片赤腐病抗性评价技术规程

1范围

本文件确立了甘蔗叶片赤腐病抗病性评价技术规程，规定了术语和定义、评价程序、接种体制备、

接种、病情调查及抗病性评价的要求。

本文件适用于甘蔗种质材料和甘蔗品种（系）对叶片赤腐病的抗性评价。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

T/CSTC02-2023甘蔗梢腐病抗性评价技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

甘蔗叶片赤腐病sugarcaneleafredrotdisease

由镰孢炭疽菌（ColletotrichumfalcatumWent）引起的发生在甘蔗叶片上的真菌病害。

4评价程序

甘蔗叶片赤腐病评价流程包括6个步骤，评价流程图见图1。

图1甘蔗叶片赤腐病抗性评价流程

1

5接种体制备

5.1病原菌分离评价

用真菌分离培养的方法从叶片赤腐病病叶上的病原物，并用病原物的特异引物ITS1/ITS4进行PCR

分子评价。叶片赤腐病病原菌的详细信息见附录A。

5.2病原菌的保存

用50%甘油悬浮，于-80℃超低温冰箱进行长期保存。

5.3病原菌接种体制备

将保存的菌株活化至PDA培养基平皿上，置于28℃培养箱培养5d，用5mm打孔器制成菌饼用

于接种。

6接种

6.1田间自然接种

6.1.1田间鉴定圃

田间鉴定圃设置参照T/CSTC02-2023的要求执行。

6.1.2田间试验设计

每个材料挑选蔗芽饱满、一致的种芽300个于春季种植在鉴定圃中。试验采用完全随机区组设计，

单行区，行长8m~10m、行距1.2m，3次重复，每个小区种植100个芽，试验区四周设置保护行。

试验材料包括高感和高抗对照种，标准对照品种见附录B。

6.2人工接种

6.2.1室内苗期接种

温室环境温度保持在27℃~33℃，湿度保持在75%~88%。采用完全随机区组设计，设置3个

重复，每个材料每个重复30株苗，将待评价材料种植于桶内，每个桶内保留3株苗，试验材料包括高

感和高抗标准对照品种，详见附录B。待甘蔗材料长到4叶~5叶期时，使用无菌注射器在甘蔗叶片中

部中脉造成微创伤口，将菌饼贴在创伤处，用保鲜膜包裹，用PDA无菌菌饼作阴性对照。

6.2.2离体叶段接种

拔节初期选取长势一致的待评价甘蔗材料+1叶30片，设置3个重复，包括高感和高抗标准对照品

种，详见附录B。剪取8cm~10cm整齐对称无裂痕叶段，使用无菌注射器在甘蔗叶片中部中脉造成微

创伤口，将菌饼贴在创伤处，置于含有三层消毒湿润滤纸的方盘中，每个品种每个重复接种叶片放置于

同一个方盘，保证相同的湿度条件，用保鲜膜将方盘密封，置于25℃~30℃光照培养箱中培养，光周

期为12h光照/12h黑暗，用PDA无菌菌饼作阴性对照。

7病情调查

7.1调查时间

2

7.1.1田间自然接种

在甘蔗伸长盛期7月、8月、9月，每月调查一次。

7.1.2室内苗期

在接种后7d~10d观察到叶片赤腐病症状，每隔24h记录发病情况，持续观察30d直至病情稳定。

7.1.3离体叶段

在接种后24h观察到叶片赤腐病症状，每隔24h记录发病情况，持续观察7d直至病情稳定。

7.2分级标准

甘蔗叶片赤腐病评价分级标准见附录C。

7.3记载方法

田间自然接种和室内苗期抗性评价记载方式为分别记录每个重复的总株数，用目测法统计甘蔗叶片

的发病株数及每一株的病害级别，调查并记载病害级别。甘蔗叶片赤腐病田间自然接种和室内苗期抗性

评价调查记载汇总表见附录D表D.1。

离体叶段抗性评价记载方式为通过观察和测量病斑的长度，统计记录甘蔗叶段的病害级别。甘蔗叶

片赤腐病离体叶段抗性评价调查记载汇总表见附录D表D.2。