植物生理实验四专家讲座.pptxVIP

试验四、

过氧化氢酶活性测定

（高锰酸钾滴定法）;

过氧化氢酶（CAT）普遍存在于植物全部组织中，其活性与植物代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。;;过氧化氢酶属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。可依据H2O2消耗量或O2生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量（反应过量）过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多出过氧化氢。即可求出消耗H2O2量。

5H2O2＋2KMnO4＋4H2SO4→5O2＋2KHSO4＋8H2O＋2MnSO4;（一）材料：

新鲜植物叶片

（二）仪器设备：

1.研钵；2.试管；3.酸式滴定管；4.恒温水浴锅；5.容量瓶/量筒。;（三）试剂：

1.10%H2SO4；

2.0.2mol/LpH7.8磷酸缓冲液；

3.0.1mol/L高锰酸钾标准液:KMnO43.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，再用0.1mol/L草酸溶液标定；;;（一）酶液提取：取植物叶片1g加入pH7.8磷酸缓冲溶液少许，研磨成匀浆，转移至20ml容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至20ml容量瓶/量筒中，用同一缓冲液定容，４000rpm离心1５min，上清液即为过