- 1、本文档共12页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
用于鉴别鸭瘟病毒的引物组合物及试剂盒的制作方法
专利名称:用于鉴别鸭瘟病毒的引物组合物及试剂盒的制作
方法
技术领域:
本发明涉及动物医学领域,具体涉及用于鉴别鸭瘟病毒的引
物组合物及试剂盒。
背景技术:
鸭痕病毒(DuckEnteritisVirus)是引起鸭痕(DuckPlague)
的病原,属于一种疱疹病毒,能感染48种以上的雁形目的家
禽和野生禽类。鸭瘟,又称鸭病毒性肠炎,是一种急性传染
病,其发病率和病死率可达100%,鸭瘟的病变包括血管损伤,
胃肠道粘膜的进行性变化,淋巴器官病变和实质性器官的退
行性变化。接种鸭瘟弱毒疫苗是控制该病的有效方法。鸭瘟
病毒能在三叉神经节形成持续性感染。鸭瘟病毒的诊断方法
有病毒中和试验(NT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和PCR试
验等。NT、ELISA和普通的PCR方法只能诊断是否是鸭瘟病
毒,但无法鉴别鸭瘟病毒是强毒株还是弱毒株。公开的发明
专利“一种鉴别鸭瘟病毒强毒与疫苗毒的PCR检测方法”(申
请号:201210116719.2),通过UL2基因差异区分鸭瘟病毒强、
弱毒株,但此方法仅能鉴别鸭瘟病毒是强毒还是弱毒,而无
法鉴别鸭瘟病毒是欧洲源的强毒,还是中国源的强毒,也无
法鉴别是中国的疫苗毒(弱毒)的VAC株或是Clone-03株。
发明内容
本发明的目的是提供用于鉴别鸭瘟病毒的引物组合物,特异
性强,能够鉴别样品是否感染鸭瘟病毒;如果样品感染鸭瘟
病毒,究竟是欧洲强毒株、中国强毒株、中国疫苗株(弱毒
株)VAC株还是中国疫苗株(弱毒株)Clone-03株。本发明的
另一目的是提供用于鉴别鸭瘟病毒的试剂盒,能够鉴别样品
是否感染鸭瘟病毒;如果样品感染鸭瘟病毒,究竟是欧洲强
毒株、中国强毒株、中国疫苗株(弱毒株)VAC株还是中国疫
苗株(弱毒株)Clone-03株。本发明的再一目的是提供上述引
物组合物的应用。用于鉴别鸭瘟病毒的引物组合物,由上游
引物和下游引物组成,所述上游引物和下游引物的序列分别
如SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示。所述上游和下游引物的
浓度为0.01mol/mlo用于鉴别鸭瘟病毒的试剂盒,包括所述
引物组合物、PCR缓冲液、dNTPs和ExTaq酶。所述dNTPs
为dATP、dTTP,dGTP和dCTP的等浓度混合物,所述dATP、
dTTP,dGTP或dCTP的浓度均为2.5Mm。所述弓I物组合物在
制备用于鉴别鸭瘟病毒的试剂盒中的应用。一种应用所述引
物组合物鉴别鸭瘟病毒的方法:
(1)提取待检样品的DNA;
(2)以步骤(I)中所述DNA为模板,用权利要求1或2所述
引物组合物为引物,进行PCR扩增反应,获得PCR产物;
(3)将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,判断所述PCR产物的
长度;当PCR产物长度为4430-4460bp时,待检样品感染中
国来源的鸭瘟病毒强毒株;当PCR产物长度为3260-3290bp
时,待检样品感染欧洲来源的鸭瘟病毒强毒株;当PCR产物
长度为920_950bp,待检样品感染中国来源的鸭瘟病毒VAC
株;当PCR产物长度为2510-2540bp,待检样品感染中国来
源的鸭瘟病毒Clone-03。所述中国来源的鸭瘟病毒强毒株为
鸭瘟病毒LH2011株和CHv株中的一种或两种;所述欧洲来
源的鸭瘟病毒强毒株为鸭瘟病毒Jansen、Holland、
Dll-JW-016和v2085株中的一种或两种以上。步骤(2)中PCR
扩增反应的条件为:94°C预变性3min;94°C变性30sec,
52°C退火40sec,72°C延伸3min40sec,循环40次;最
后72°C延伸IOmin0本发明提供的引物组合物或试剂盒,
能够鉴别样品是否感染了鸭瘟病毒;如果感染鸭瘟病毒,究
竟是欧洲强毒株、中国强毒株、中国疫苗株(弱毒株)VAC株
还是中国疫苗株(弱毒株)Clone-03株。采用本发明的引物组
合物或试剂盒鉴别鸭瘟病毒,快速、简便,特异性和敏感性
强,而且成本低廉。适用于临床诊断,科学研究,疫苗生产
和出入境检测等,应用前景广阔。
:
图1为不同毒株鸭瘟病毒的LORFll等位基因序列的比较。
图中Jansen、Holland、Dll-Jff-016和v2085株是欧洲鸭
瘟强毒株,LH2011和CHv株是中国鸭瘟强毒株
文档评论(0)