用扫描电镜对样品或试件进行观察时样品需要做哪些处理.pdfVIP

用扫描电镜对样品或试件进行观

察时样品需要做哪些处理

在进行扫描电镜观察前，要对样品作相应的处理。扫描电镜

样品制备的主要要求是:尽可能使样品的表面结构保存好，没

有变形和污染，样品干燥并且有良好导电性能。那么接下里就

让我们来看看对样品该如何处理吧。

一、样品的初步处理

(一)取材

扫描电镜来说，样品可稍大些，面积可达8mm×8mm，

厚度可达5mm。对于扫描电镜易卷曲的样品如血管、胃肠道粘

膜等，可固定在滤纸或卡片纸上，充分暴露待观察的组织表

面。

(二)样品的清洗

扫描电镜观察到的部分往往是样品的表面，也就是组织的自由

表面。由于样本取自活体组织，其表面往往附着有血液、组织

液或粘液，会覆盖样本的表面结构，影响观察。因此，在样品

被固定之前，这些附件应该被清洁。

(三)固定

固定所用试剂与透射电镜制样所用试剂相同，双固定常用戊

二醛和锇酸。由于样本量较大，固定时间应适当延长。也可

通过速冻来固定。

(四)脱水

漂洗后，样品用浓度逐步增加的乙醇或丙酮脱水，然后进入

中间液，通常用乙酸异戊酯作为中间液。

二、样品的干燥

扫描电镜观察样品要求在高真空中进行。无论是水或脱水

溶液，在高真空中都会产生剧烈地汽化，不仅影响真空度、污

染样品，还会破坏样品的微细结构。因此，样品在用电镜观察

之前必须进行干燥。干燥的方法有下几种:

(一)空气干燥法

空气干燥法又称自然干燥法，就是将经过脱水的样品，让

其暴露在空气中使脱水剂逐渐挥发干燥。这种方法的优点是简

便易行和节省时间;它的主要缺点是在干燥过程中，组织会由

于脱水剂挥发时表面张力的作用而产生收缩变形。因此，该方

法一般只适用于表面较为坚硬的样品。

(二)临界点干燥法

临界点干燥法是利用物质在临界状态时，其表面张力等于

零的特性，使样品的液体完全汽化，并气体方式排掉，来达

到完全干燥的目的。这样就可避免表面张力的影响，较好地

保存样品的微细结构。此法操作较为方便，所用的时间也不算

长，一般约2~3小时即可完成，所是常用的干燥方法。

(三)冷冻干燥法

冷冻干燥是将冷冻样品置于高真空中并通过升华从样品中除

去水或脱水剂的过程。冷冻干燥是基于样品中的冰升华，即水

直接从固体变成气体，不经过中间液体，样品上不存在气相和

液相之间的表面张力的作用，从而减少了干燥过程中对样品的

损伤。