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用扫描电镜对样品或试件进行观
察时样品需要做哪些处理
在进行扫描电镜观察前,要对样品作相应的处理。扫描电镜
样品制备的主要要求是:尽可能使样品的表面结构保存好,没
有变形和污染,样品干燥并且有良好导电性能。那么接下里就
让我们来看看对样品该如何处理吧。
一、样品的初步处理
(一)取材
扫描电镜来说,样品可稍大些,面积可达8mm×8mm,
厚度可达5mm。对于扫描电镜易卷曲的样品如血管、胃肠道粘
膜等,可固定在滤纸或卡片纸上,充分暴露待观察的组织表
面。
(二)样品的清洗
扫描电镜观察到的部分往往是样品的表面,也就是组织的自由
表面。由于样本取自活体组织,其表面往往附着有血液、组织
液或粘液,会覆盖样本的表面结构,影响观察。因此,在样品
被固定之前,这些附件应该被清洁。
(三)固定
固定所用试剂与透射电镜制样所用试剂相同,双固定常用戊
二醛和锇酸。由于样本量较大,固定时间应适当延长。也可
通过速冻来固定。
(四)脱水
漂洗后,样品用浓度逐步增加的乙醇或丙酮脱水,然后进入
中间液,通常用乙酸异戊酯作为中间液。
二、样品的干燥
扫描电镜观察样品要求在高真空中进行。无论是水或脱水
溶液,在高真空中都会产生剧烈地汽化,不仅影响真空度、污
染样品,还会破坏样品的微细结构。因此,样品在用电镜观察
之前必须进行干燥。干燥的方法有下几种:
(一)空气干燥法
空气干燥法又称自然干燥法,就是将经过脱水的样品,让
其暴露在空气中使脱水剂逐渐挥发干燥。这种方法的优点是简
便易行和节省时间;它的主要缺点是在干燥过程中,组织会由
于脱水剂挥发时表面张力的作用而产生收缩变形。因此,该方
法一般只适用于表面较为坚硬的样品。
(二)临界点干燥法
临界点干燥法是利用物质在临界状态时,其表面张力等于
零的特性,使样品的液体完全汽化,并气体方式排掉,来达
到完全干燥的目的。这样就可避免表面张力的影响,较好地
保存样品的微细结构。此法操作较为方便,所用的时间也不算
长,一般约2~3小时即可完成,所是常用的干燥方法。
(三)冷冻干燥法
冷冻干燥是将冷冻样品置于高真空中并通过升华从样品中除
去水或脱水剂的过程。冷冻干燥是基于样品中的冰升华,即水
直接从固体变成气体,不经过中间液体,样品上不存在气相和
液相之间的表面张力的作用,从而减少了干燥过程中对样品的
损伤。
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