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土壤酶活性测定实验步骤

土壤酶的测定

1．三角瓶用稀HNO

3（3-5%）或用洗衣粉浸泡24h，后洗漱，尔后再用蒸馏水润洗，晾干。

2．土样研磨精巧后分袋装好。土量需2g+2.5g+5g+5g=14.5g，重复一次，

14.5×2=29g。

一、过氧化氢酶（容量法）（关松荫P323）

1．试剂配制：

(1)0.3%过氧化氢溶液：

①（1：10030%的H

2O

2和水）

②（0.5molH

2O

2+49.5ml蒸馏水）

③（1ml30%H

2O

2+99ml蒸馏水）

(2)3N硫酸：

（10ml硫酸+50ml水）

(3)0.1N高锰酸钾溶液：

（1.58gKMnO

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4+100ml蒸馏水）

2．操作步骤：

2g风干土置100三角烧瓶→注入40ml蒸馏水和5ml0.3%过氧化氢（现配）

→在往来式振荡机上振荡20min→加入5ml3N硫酸（以牢固未分解的H

2O

2）→用慢速型滤纸过滤，→吸取25ml滤液，用0.1N高锰酸钾的滴定至淡

粉红色

3．结果计算

过氧化氢酶的活性（M），以20min后1g土壤的0.1NKMnO

4的毫升数表示：

M=（A－B）×T

式中：

A：

空白耗资的0.1NKMnO

4毫升数

B：

滤液耗资的0.1NKMnO

4毫升数

T：

KMnO

4滴定度的校正当

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备注：

以容量法测H2O2的酶活：

Kappen

（1913）第一介绍硫酸存在下用高锰酸钾滴定节余的过氧化氢测定酶活

。此法依照H

2O

2与土壤相互作用时，未分解的H

2O

2的数量用容量法（常用高锰酸钾滴定未分解的H

2O

2）测定H

2O

2的酶活

2KMnO

4＋5H

2O

2＋3H

2SO

4→2MnSO

4＋K

2SO

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4＋8H

2O＋5O2土壤H

2O

2酶促过氧化氢的分解有利于防范它对生物体的伤害作用

二、蔗糖酶（P278）滴定法

1.试剂配制：

(1)20％蔗糖：

（20g蔗糖＋80ml水或12.5g蔗糖＋50ml水）

(2)甲苯(解析纯)

(3)PH5.5醋酸盐－磷酸盐缓冲液

0.5ml磷酸氢二钠·12H

2磷酸二氢钾（）

磷酸氢二钠·12H

2：23.88gNa

2HPO

4,，加H

2O溶解，定容至100ml。

磷酸二氢钾（）：9.072gKH

2PO

4，加H

2O溶解，定容至1000ml。

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