医学分子生物学实验技术-PPT幻灯片.pdfVIP

第一章蛋白质的分离纯化

•生命大分子物质的特点：

•1、生命大分子是动物、植物和微生物在进

行新陈代谢时所产生的活性物质

•2、生命大分子的特殊性和复杂性

•3、生命大分子都是由简单的小分子构成的

物

•4、具有特殊的结构和功能

•5、生命大分子不稳定

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材料的选择与处理

材料的选择

有效成分：欲纯化的某种单一的生命大分子

物质。相对于有效成分以外的物质称杂质。

组织、器官

动物

血液、分泌物

材

料植物根、茎、叶

来

源

微生物

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选材原则：

①含有效成分丰富、稳定性好；

②来源丰富、保持新鲜；

③材料适合加工提取；

④具有经济利用价值。

研究对象的选择

组织差异性

时间差异性

生理状态差异性

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(1)前处理(pretreatment)

•分离纯化某一蛋白质，首先要求把

蛋白质从原来的组织或细胞中以溶

解的状态释放出来，并保持原来的

天然状态，不丢失生物活性。

•动物材料应先剔除结缔组织和脂肪

组织。

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种子材料应先去壳甚至去种皮以免

受杂质的污染，油料种子最好先用

低沸点的有机溶剂如乙醚等脱脂。

然后根据不同的情况，选择适当的

方法，将组织和细胞破碎。

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捣碎法

机械破碎法研磨法

匀浆法

温度差破碎法

物理破碎法压力差破碎法

超声破碎法

化学破碎法利用化学渗透的方法，通过有机

溶剂、抗生素、表面活性剂、金属熬合剂、变

性剂等，使细胞膜破碎的方法。

酶促破碎法利用酶的活性破坏细胞膜的化学

结构使细胞膜破碎的方法。

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•如果所要的蛋白质主要集中在某一

细胞组分，如细胞核、染色体、核

糖体或可溶性的细胞质等，则可利

用差速离心方法将它们分开

在不同离心力场下沉降的细胞器

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如果碰上所要蛋白质是与细胞膜或膜

质细胞器结合的，则必须利用超声波

或去污剂使膜结构解聚，然后用适当

的介质提取。

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(2)粗分级分离(roughfra