液相色谱仪的维护与保养.pdfVIP

1.首先打开purge阀，用纯水，流速5ml/min，压力大于10bar，就是purge

阀滤芯脏了，更换滤芯后，压力应该在0或1。

2.如果上面没问题，关闭purge阀，不装柱子，纯水，流速1ml/min，压力应小

于20bar。否则，就是管路堵了。从试剂瓶的滤头开始检查，一直到柱前。看管

路有没有长菌，或者有盐。

3.如果还没有问题，要看你的流动相有没有配错。

4.最后，你确定柱子没有问题？

最近实验室中的安捷伦1200液相色谱仪的针座、管线反复出现堵塞的

情况，经过对样品进行检查，样品为溶剂萃取法得到的样品，进样前还

经过高速离心处理，从外观看样品清澈，未见杂质，样品的问题基本可

以排除了。

再检查一下我们的样品瓶，样品瓶的隔垫是反复使用且已经用了好长一

段时间了，隔垫被扎的次数多，不可避免的就有胶垫碎屑脱落，恰好有

很小的一块扎到取样针里，顺着流动向就被冲进针座，如果通过针座也

很有可能赌塞在管路中。

发现这样的问题，首先将样品瓶的隔垫进行挑选，用新隔垫替换使用次

数较多的隔垫，问题没有再次出现。

问题总结：消耗品定期需要更换，有时为了省钱却耽误大事。

液相色谱仪的维护与保养

液相色谱仪是属于易学难用的仪器，特别讲究正“确使用”和经验。

液相工作者接触最多的是流动相，也就是流动相，是造成液相色谱各种问题

的最主要源头。

液相色谱仪最常见的故障一是堵，二是漏。下面就这两点分别展开讨论。(注：

流动相以甲醇为例，色谱柱以C18为例)

堵“”的表现现象就是柱压异常升高，直接原因就是流路不畅。堵塞的主要位

置就是在色谱柱的前端，最主要原因就是流动相里有杂质，杂质的主要来源就是

细菌。

堵“”的原因之一：配制流动相时细菌污染。

首先我们要认识到，一般的国产甲醇其实不需要额外过滤处理，直接使用没

有问题。即使是有些固态微粒杂质，也能在液相流路系统最前端的过滤头上排除，

真正容易引起问题的，是水中的细菌。

新制备的纯水在室内放置几天就会长菌，而这些细菌虽然肉眼不可见，却足

以堵塞柱填料颗粒的空隙，造成柱子很快报废。这就是在配制流动相时造成的细

菌污染的原因，解决它的方法很简单，就是确保水的可靠性。这里有两种方式推

荐：

(1)最理想的方式当然是购买实验室专用纯水机，既方便又可靠，质量也放

心。唯一的缺点就是价格不菲。

(2)成箱购买市售品牌纯净水，如500ml一支的怡宝或娃哈哈，这些水的

质量足以应付液相色谱的要求。先随机抽取一支做一下细菌平板实验，待菌落数

合格方可使用。这样每次只要单独开一支即可，也很方便。每次成本2元左右。

这里特别指出一个细节：在绝大多数书本上，凡谈到配制流动相都会谈到最

后有一个过滤的步骤。但是从我们长期使用的实际效果来说，只要能保证水的质

量，这一步完全可以也应当去除。原因有以下三点：

(1)流动相过滤在理论上有好处，但是实际操作时由于不可能做到专瓶专用，

反而容易造成的交叉污染，对于配比复杂的流动相影响更大。

(2)流动相过滤在经济成本上不划算。买一套过滤装置要6000多元，且过滤

器公认是比较容易损坏的设备。最主要是过滤片的成本太高，一片就要几十元。

按一般液相柱的正常使用寿命计算，过滤片的成本会远远高于色谱柱的成本。

(3)流动相过滤对于工作效率成本不划算。使用溶剂过滤器有一个预清洗、

装备、使用、用后清洗，晾干的过程，至少也有一个小时的时间。这个成本也不

能忽视。

(4)在实际工作未发现流动相不过滤会对柱寿命有任何影响。我们起码有6

年时间没有做过流动相过滤的工作，但是和国内同行相比较，在同等使用强度下

我们的柱寿命是比较长的。

堵“”的原因之二：使用流动相时的细菌污染。

指的是：流动相刚开始没有长菌，在使用时却产生了细菌污染。这主要是在

使用多元液相色谱仪时的一种不良使用习惯造成的。

举最简单的例子：50%的甲醇水流动相，有两种使用方式。一种方式是在上

机前就配好混合在一起，另一种方式是在流路A放纯甲醇，流路B放纯水。

从单纯实验效果来说，后一种有明显的优点：首先是简单，不需要实验者另

个计算配比混合，其次就是比例准确，能得到保留时间重复性极好的实验效果。

但是，它有一个致命的缺陷，就是纯水在流动相瓶中几天时间就会长细菌(很

多情况下不仅仅用纯水作流动相，而是用缓冲